Page 162 - 《精细化工》2023年第6期
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·1312·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 40 卷

            1.2.2  OSA/CNCs/PAM-GT 复合水凝胶的结构表征                               BR / %   W  W t    100   （3）
                                                                                     0
                   和性能测试                                                              W 0
                 通过 FTIR、XRD 和 TGA 对 OSA/CNCs/PAM-GT           1.2.4  OSA/CNCs/PAM-GT 复合水凝胶的细胞相容
            复合水凝胶组分间的相互作用进行检测和表征。在                                   性测试
            FTIR 测试中，取少量样品与溴化钾放置于玛瑙研钵                              先将 OSA/CNCs/PAM-GT 复合水凝胶用照射强
            中进行研磨压片后，利用傅里叶变换红外光谱仪在                             度为 8 kGy 的钴 60 射线进行灭菌。以 24 孔组织培
                            –1
            波数 4000~400 cm 处测定样品的红外谱图，分析其                      养板作为模具，将灭菌后的水凝胶（0.10~0.22 g）
            主要官能团的变化。XRD 测试是在 40 kV 和 100 mA                   放置在 24 孔板中，并向其中加入 500 μL DMEM 细
            下，以扫描速率 0.025(°)/s 在 2θ=5°~60°扫描范围测                胞培养基静置 12 h。利用体外培养人骨瘤 MG63 细
            定样品的晶体结构。在 TGA 测试中，以升温速率为                          胞来评定样品的生物性能。MG63 细胞经过复苏和
            10  ℃/min、温度范围在 30~800  ℃条件下对样品进                   在表面皿上的贴壁生长，将培养到 3~4 代的 MG63
                                                                          4
            行热稳定性能测定，实验全程通 N 2 保护。                             细胞以 5×10 个细胞/孔的密度接种到复合水凝胶材
                 采用扫描电子显微镜和压汞仪对 OSA/CNCs/PAM-                  料上。同时，作为空白对照采用相同的方式将细胞
            GT 复合水凝胶的形貌和孔隙结构进行表征。在 SEM                         接种到无材料的 24 孔板中。添加细胞培养液，使每
            测试中，样品被切割成边长约为 2 mm 的立方体，                          孔培养基总量达到 500 μL。最后将孔板放置到含体
            喷金后对复合水凝胶的横截面形貌进行观测。利用                             积分数为 5% CO 2 的培养箱中于 37  ℃下培养。实验
            压汞仪对多孔复合水凝胶材料的孔隙率进行测定。                             中所用到的培养基采用体积分数为 90% DMEM、体
            先将样品在 110  ℃条件下加热干燥去除物理吸附                          积分数为 9%胎牛血清和体积分数为 1%的双抗（青
            水，再将其放在样品盒内，调节压力使水银渗透到                             霉素和链霉素，质量比为 1∶1）混合而成。实验过
            每个孔内，测试结果经微电脑程序处理后得出。                              程中每 2 d 更换一次培养液。
            OSA/CNCs/PAM-GT 复合水凝胶的机械性能通过万                          细胞在材料上接种 2 d 后，将组织培养板中的
            能材料试验机进行测试。测试样品的底面直径为                              培养基用移液枪吸出，用 PBS 溶液冲洗 3 次后再用
            18 mm，高为 10 mm。测试时，垂直于样品表面纵                        质量分数为 2.5%的戊二醛溶液交联固定 20 min。再
            向压缩，压缩速率为 5 mm/min，当材料压碎或其应                        用超纯水冲洗经戊二醛固定负载细胞的水凝胶材
            变大于 60%时停止。对于获取的应力-应变曲线，每                          料，直至残留的戊二醛冲洗干净后于–50  ℃条件下
            条曲线的线性最高点为该样品的压缩强度。                                冷冻干燥 48 h。随后利用扫描电子显微镜来观察细
            1.2.3  OSA/CNCs/PAM-GT 复合水凝胶的溶胀性与                  胞在复合水凝胶表面的黏附情况以及 MG63 细胞的
                   生物降解性测试                                     形貌特征。
                 将复合水凝胶浸泡在 pH 7.4 PBS 溶液中放置于                       细胞在复合水凝胶材料上的活性采用 CCK-8 试
            37  ℃培养箱中孵育 2 h 后取出，用滤纸轻轻擦拭                        剂盒来进行测定。更换（采用移液枪先将培养板里
            材料表面后再进行称量，每组重复 3 次。每个时间                           的培养基吸掉，再补充等体积的新鲜培养基）细胞
            间隔的样品的溶胀率用 SR（%）来表示，具体计算                           在材料上增殖 2 d 的培养基后，加入 50 µL 的 CCK-8
            方法见式（2）。样品溶胀前后的质量分别记为 W O                          试剂，再将其放置到 37  ℃、体积分数为 5% CO 2
            （g）和 W S （g）。                                      的培养箱中培育 4 h。在 24 孔板中用移液枪吸取
                                 W  W                         100 µL 的溶液到 96 孔板中，摇匀后，利用酶标仪
                         SR / %   S   O    100      （2）
                                   W O                         检测 450 nm 处的吸光度（OD）。利用碱性磷酸酶
                 准确称量 0.01 g 的溶菌酶放置在 50 mL 的烧杯                 （ALP）试剂盒来检测细胞在材料上的分化情况。
            中，用移液管移取 20 mL PBS 溶液（pH 7.4，                      将培养了 7 d 细胞的复合水凝胶用 PBS 溶液清洗直
            0.1 mol/L），配制成包含 10000 U/mL 溶菌酶的 PBS               至没有胎牛血清，即可定性为无培养基，加入质量
            溶液。将称重的复合水凝胶（质量记为 W 0 ，g）浸                         分数为 0.1%的 TritonX-100 溶液后放置于冰浴中裂
            泡在此溶液中再放置到 37 ℃的培养箱中降解。分别                          解。取 50 µL 的上清液到 96 孔板中，再加入 50 µL
            在 7、14、21 d 时取出样品，用去离子水轻轻地清                        ALP 显色试剂，用枪头吹打均匀。静置 30 min 后，
            洗干净后将样品放在 110 ℃的烘箱中烘至恒重后进                          加入 100 µL 的反应终止液（由 ALP 试剂盒提供）。
            行称重，记为 W t （g）。通过测量样品的质量损失来                        最后，利用酶标仪在 405 nm 处读取 OD 值来检测细
            评估复合水凝胶的生物降解率（BR，%），具体的运                           胞的分化情况。同时，将细胞在 24 孔组织培养板中
            算方式见公式（3）。                                         的增殖或分化情况作为空白对照。用相对 ALP 活性
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