Page 94 - 《精细化工》2020年第7期

·1376· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 37 卷

子 BDP-NBD 的特征峰逐渐消失，而在 6.44 min 处
出现了一个来自前驱体Ⅲ的特征峰。这表明生物硫
醇的引入可以使探针分子的醚键断裂，从而释放出
具有强荧光发射的前驱体Ⅲ，这也和文献[23]中报
道的机理一致。

图 4 加入不同生物硫醇后 BDP-NBD 的高效液相色谱图
Fig. 4 HPLC spectra of probe BDP-NBD with addition of
different biothiols

探针分子 BDP-NBD 对不同生物硫醇的响应时
间如图 5 所示。实验结果表明，探针分子对 Cys、
Hcy 和 Gsh 均具有良好的响应。在 Cys 和 Hcy 加入
后，探针分子溶液处于 633 nm 处的荧光强度开始迅
速增强；而加入 Gsh 后，溶液的荧光强度在一开始
并没有明显变化，但在 20 s 后，溶液的荧光强度得
到显著提升。这可能是 Gsh 较大的体积减缓了和探
针分子的结合效率所致。在 200 s 后，加入不同生物
硫醇后的探针分子溶液的荧光强度逐渐趋于稳定。

图 6 不同量（0~30 nmol）的生物硫醇 Hcy（a）、Gsh（b）
–5
和 Cys（c）条件下，探针分子 BDP-NBD（1×10 mol/L）
在 DMSO 溶液中的发射光谱以及检测生物硫醇的
标准曲线（插图）
–5
Fig. 6 Emission spectra of probe BDP-NBD (1×10 mol/L in
DMSO) addition of Hcy (a), Gsh (b) and Cys (c) (0~30
nmol ) and the standard curves of BDP-NBD (inset)

由图 6 可知，随着生物硫醇量的增加，处于约
633 nm 处的荧光强度得到明显增强，探针分子溶液

图 5 加入不同生物硫醇（30 nmol）后 BDP-NBD（1× 颜色从深紫色逐渐变为紫红色，并展现出明显的红
–5
10 mol/L）的 DMSO 溶液在 633 nm 处的时间响 光发射。根据其检测生物硫醇的线性拟合标准曲线
应荧光光谱图 计算得知，探针分子 BDP-NBD 对生物硫醇均展现
Fig. 5 Reaction time profiles of probe BDP-NBD (1× 出较低 的检 出限（ Hcy: 6.51×10 mol/L ， Gsh:
–8
–5
10 mol/L in DMSO) at 633 nm with addition of –8 –8
different biothiols (30 nmol) 4.25×10 mol/L，Cys: 4.28×10 mol/L）。结果表明，
探针分子 BDP-NBD 对各种生物硫醇均具有良好的

2.4 生物硫醇滴定 检测效果。
–5
在探针分子 BDP-NBD 的 DMSO 溶液（1× 10 2.5 生物硫醇竞争性
mol／L）中加入 BDP-NBD 物质的量不同倍数的生 为一步探究探针分子的灵敏度，在不同金属离
物硫醇(Cys、Hcy 和 Gsh，0~30 nmol)，其发射光谱 子及 Asp 存在的条件下，检测了探针分子对生物硫
及检测生物硫醇的标准曲线如图 6 所示。 醇的检测效果。结果如图 7~9 所示。