Page 88 - 《精细化工》2021年第5期
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·942·                             精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 38 卷

            小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系 RAW 264.7）有明                        公司；NanoPlus-3 纳米粒度与 Zeta 电位分析仪，美
            显的细胞毒性。由于在合成 BNNTs 过程中会不可避                         国 Micromeritics 公司；F-7000 荧光光谱仪，日本日
            免地引入金属催化剂、硼氧化物等杂质，因此对                              立公司；Multiskan FC 酶标仪，美国 Thermo Fisher
            BNNTs 进行纯化处理是必不可少的。KOI 等                [15] 在进    公司；TCS SP8 激光共聚焦显微镜，德国 Leica 公
            行 BNNTs 的纯化研究中，先后采用 4 mol/L 的 HCl                  司。
            和 1 mol/L HNO 3 处理 BNNTs，发现该方法可以有效                 1.2  BNNTs 的羟基化处理
            地去除催化剂及无定型 B 粉等杂质，但搅拌时间高                               对 BNNTs 的羟基化处理过程参照文献                [17,19] 方
            达 30 h，这可能与采用的硝酸浓度太低有关。结晶                          法，不同之处为硝酸浓度以及处理时间和温度。具
                                               2
            度较好的 BNNTs 中的 B、N 原子以 sp 杂化成键，                     体步骤如下：将 100 mg BNNTs 置于 50 mL 的 HCl
            很难与水分子间形成稳定的氢键，使得 BNNTs 具有                         溶液中（3 mol/L），90  ℃加热 10 min 后过滤，去除
            超疏水性     [16-17] 。ZHI等 [18] 用 H 2 O 2 在高温高压下与      BNNTs 中混有的金属杂质, 40  ℃烘箱干燥。取 30
            BNNTs 反应，成功地在 B 位点引入—OH 以及 N 位                     mg 纯化后的 BNNTs 分散在 10 mL 浓 HNO 3 溶液中，
            点引入—NH 2 ，使得原本疏水的 BNNTs 变得具有水                      超声处理 1 h 后 70  ℃搅拌过夜，离心洗涤并置于
            溶性。此外，CIOFANI 等         [19] 用浓硝酸对 BNNTs 进         60  ℃的烘箱中烘干得到 BNNTs-OH。
            行 6 h 超声处理，BNNTs 被氧化并在表面引入—OH                      1.3  BNNTs-OH 的表征
            基团，为后续共价修饰提供了结合位点。但这些研                                 将制备的 BNNTs-OH 压制成片，采用 XPS 进行
            究均未对氧化处理后的 BNNTs 进行系统表征以及                          元素分析。利用激光显微镜和 TEM 观察 BNNTs 及
            其生物相容性进行评价。                                        BNNTs-OH 的形貌。将烘干后的 BNNTs-OH 采用 KBr
                 基于本课题组已开发的一种宏量合成 BNNTs                        压片法进行压片，利用 FTIR 进行扫描。利用 TGA
            的方法    [20] ，本文首先采用 HCl 处理所得的 BNNTs，
                                                               对 BNNTs-OH 的热稳定性进行分析，以 N 2 （体积分
            将样品中的金属催化剂杂质去除。采用浓硝酸将长                             数为 99.995%）为载气，流速 10 mL/min，20  ℃/min
            度达到数十微米的 BNNTs 氧化，以缩短羟基化时
                                                               升温，将样品从 35  ℃升温至 800  ℃。利用纳米粒
            间，同时可在表面缺陷处有效截断 BNNTs，使其容                          度与 Zeta 电位仪对制备的 BNNTs-OH 的 Zeta 电位
            易进入细胞中。为了考察 BNNTs-OH 的生物相容性，                       和粒径分布进行分析，以去离子水作为分散剂，每
            本文选用人胚胎肝细胞系 L02 细胞作为研究对象，                          次实验重复 5 次取平均值。利用荧光光谱仪在室温
            采用 CCK8 法    [21] 对所制备 BNNTs-OH 的细胞毒性进             下（25  ℃）对 BNNTs 和 BNNTs-OH 的荧光特性（PL）
            行考察。这可为羟基化 BNNTs 在生物医药领域的应
                                                               进行分析，激发波长为 372 nm。
            用研究提供较好的参考价值。                                      1.4   细胞培养
                                                                   将人胚胎肝细胞系 L02 细胞培养在完全培养液
            1   实验部分
                                                               中，然后置于 37  ℃，饱和湿度 95%，含 5%（体
            1.1   试剂与仪器                                        积分数）CO 2 培养箱中进行培养。完全培养液由
                 BNNTs 按文献[20]自制；37.5%（质量分数）浓                  DMEM  添加 10%（体积分数）胎牛血清及 1%（体
            盐酸、98%（质量分数）浓硝酸，AR，国药集团化                           积分数）双抗（青霉素/链霉素，10 kU/mL 青霉素
            学试剂有限公司；细胞培养基（DMEM），美国 Gibco                       和 10 g/L 链霉素）组成。当细胞贴壁生长密度大于
            公司；胎牛血清（FBS），浙江天杭生物科技股份有                           75%以后进行传代。
            限公司；胰酶细胞消化液（含胰酶质量分数为                               1.5   细胞活力检测
            0.05%），双抗（青霉素/链霉素）、Cell Counting Kit-8                 采用 CCK-8 试剂盒进行细胞活力检测，从细胞
            细胞计数试剂（CCK-8），双苯酰亚胺 H 33342                        代谢活性角度间接反映细胞的生长状况。具体过程
            （Hoechst 33342）细胞染色液，上海碧云天生物技                      如下：
            术有限公司；异硫氰酸荧光素（FITC）标记的鬼笔                               观察细胞生长状态良好，待细胞进入对数生长
            环肽，上海翊圣生物科技有限公司。                                   期后用胰酶细胞消化液进行消化，利用细胞计数仪
                                                                                               4
                 Axis Supra 型 X 射线光电子能谱仪，日本岛津                  进行细胞计数。将细胞稀释成 5×10 个/mL 的单细
            公司；VK-X100 激光共聚焦显微镜，日本基恩士公                         胞悬液，取 200  μL 细胞悬浮液接种于 96 孔板
                                                                       4
            司；JEM-2100 高分辨透射电子显微镜，日本光学株                        （1.0×10 个/孔）中，并在外围加适量 PBS 缓冲液
            式会社；傅里叶变换红外光谱仪，美国 Perkin Elmer                     防止培养基蒸发，然后将培养板置于 37  ℃，5% CO 2
            仪器有限公司；209F3 热重分析仪，德国 Netzsch                      （体积分数）培养箱中进行培养使细胞贴壁。向培
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