Page 92 - 《精细化工》2020年第3期
P. 92
·510· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 37 卷
在 60 ℃下真空烘干 24 h 后，在膜表面喷金处理， 菌株 SD12 为研究对象（图 1b）。
利用环境扫描电镜观察 PLA 表面形貌变化。
红外光谱（FTIR）测试：采用红外光谱仪对降
解前后 PLA 膜进行结构表征。
X 射线衍射（XRD）测试：采用 X 射线衍射仪
测定 PLA 材料的 XRD 谱图，辐射源为 Cu 靶 K α ，
扫描范围 10°~50°，扫描电压 40 kV，扫描速度 10
（°）/min。 a—在 LB 培养基上的菌落特征；b—脱脂牛奶平板上的水解情
况；c—SEM 照片(×10000)
2 结果与讨论 图 1 菌株 SD12 的形态学特征
Fig. 1 Morphological characteristics of strain SD12
2.1 菌株 SD12 形态学鉴定
经过分离纯化后，获得一株 PLA 降解菌株 2.3 16S rRNA 基因序列鉴定及系统发育树构建
SD12，菌株 SD12 的形态学特征见图 1。由图 1 可 将测序结果在 EzBioCloud 数据库进行 Blast
知，菌株 SD12 在 LB 培养基上呈乳白色圆形、表面 比对后，结果表明菌株 SD12 的 16S rRNA 基因序
光滑湿润、边缘平整、不透明（图 1a），此菌的形 列与 Pseudomonas mendocina 的相似性最高达
状为杆状（图 1c） [19,25] 。 98.19%，并将其序列在 Genbank 中注册，登录号为
2.2 菌株 SD12 生理生化特性 MK828191。选取与其同源性相近的 14 株细菌 16S
菌株 SD12 的生理生化特性为：V-P 实验、接触 rRNA 基因序列构建系统发育树，见图 2，菌株 SD12
酶呈阳性；革兰氏染色实验、M.R 实验、淀粉水解 与 Pseudomonas mendocina 在同一分支上，表明亲
实验、油脂水解实验呈阴性；菌株 SD12 在脱脂奶 缘关系相近。综上所述，可将菌株 SD12 初步鉴定
粉培养基上出现了最大的水解圈（红色标记），选取 为 Pseudomonas mendocina 菌。
图 2 菌株 SD12 的系统发育树
Fig. 2 Phylogenetic tree of strain SD12
2.4 外源营养源的影响 如葡萄糖等，可以为菌株提供营养源，保持菌株正
不同外源营养源对菌株 SD12 酶活的影响见图 常生理活动，因此酶活大幅度提高。
3。与未加外源碳源的对照组（1.22 U/mL）对比， 在外加质量分数为 2%的葡萄糖作为外源碳源
添加不同碳源后，菌株的蛋白酶活均有大幅度增 的筛选培养基中，考察了加入不同外源氮源对酶活
加，从高到低依次为葡萄糖（12.56 U/mL）、乳酸 的影响，结果见图 3b。与对照组相比，外加胰蛋白
（ 12.13 U/mL）、淀粉（ 12.03 U/mL）、丁二醇 胨、酵母提取物、硫酸铵、硝酸钾及尿素等不同氮
（ 11.56 U/mL）、 蔗糖（ 10.94 U/mL）、己 二酸 源后，菌株的蛋白酶活从 12.56 U/mL 分别增加至
（8.64 U/mL）、对苯二甲酸（7.04 U/mL）。这是由 25.53、23.19、18.53、15.4 及 12.95 U/mL。由此可
于在筛选培养基中，菌株 SD12 难于直接利用大分 见，菌株 SD12 更易利用有机氮源，可选取胰蛋白
子的 PLA，导致菌株酶活很低，但加入外源碳源， 胨作为菌株 SD12 外源氮源作后续研究。
