Page 109 - 《精细化工》2022年第7期
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第 7 期 高 莉，等: 山杏核壳黑色素氨基酸修饰物的制备及性能分析 ·1395·
饰山杏核壳黑色素，于 40 ℃干燥处理后即为后续 DPPH•清除率/%=[1–(A–A g )/A 1 ]×100 （1）
研究对象。 式中：A g 为对照组吸光度；A 为实验组吸光度；A 1
（2）氨基酸的最佳修饰质量比优化 为空白组吸光度。
以氨基酸修饰山杏核壳黑色素水溶液在 500 nm 向反应管中依次加入 1 mL 邻二氮菲溶液、2 mL
处的吸光度为指标，探究黑色素与氨基酸的最适质 磷酸盐缓冲液（pH=7.4）、0.5 mL H 2 O、5 mmol/L
量比（分别为 1∶0.5、1∶1.5、1∶2.5、1∶3.5、1∶ 新配制的 FeSO 4 溶液 1 mL、质量分数 0.1%的 H 2 O 2
4.5、1∶5.5） [18] 。以此条件制备得到的两种氨基酸 1 mL，37 ℃水浴 60 min，536 nm 处测其吸光度（A 损）。
修饰山杏核壳黑色素用于后续结构表征和性能测定。 对照组用 1 mL H 2 O 代替 H 2 O 2 溶液，实验组用 5 mL
1.4 结构表征与性能测定 样品溶液（质量浓度分别为 0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、
1.4.1 结构表征 1.8、2.0 g/L）代替 H 2O，按式（2）计算•OH 清除率。
将山杏核壳黑色素溶于 0.1 mol/L NaOH 溶液中 •OH 清除率/%=(A样–A损)/(A未–A损)×100 （2）
配成质量浓度为 0.2 g/L 的溶液，以 0.1 mol/L NaOH 式中：A未为不含样品与 H 2 O 2 溶液的吸光度；A损为不
溶液为参照。将两种氨基酸修饰山杏核壳黑色素溶 含样品含 H 2 O 2 溶液的吸光度；A样为含样品和 H 2 O 2
于蒸馏水配成质量浓度为 0.2 g/L 的溶液，以蒸馏水 溶液的吸光度。
为参照。在波长 200~800 nm 内进行全波段扫描后分 参考文献[25]实验方法，并稍作修改。分别加
析其 UV-Vis 吸收光谱 [20] 。分别将山杏核壳黑色素及 入样品溶液 0.02 mL（质量浓度分别为 0.005、0.025、
两种氨基酸修饰山杏核壳黑色素与适量溴化钾混匀 0.05、0.10、0.15、0.20 g/L）、ABTS 应用液（7 mmol/L
–1
压片，在波数 4000~400 cm 内测定其红外光谱 [21] 。 ABTS 与 2.45 mol/L 过硫酸钾溶液混合避光反应
1.4.2 水溶性测定 12~16 h 得 ABTS 工作液，使用前用无水乙醇将 ABTS
分别取 0.01 g 样品溶于 1 mL 蒸馏水，摇匀后 工作液稀释为 OD 734 nm =0.7±0.02 的 ABTS 应用液）
静置，观察溶解情况和溶液颜色 [22] 。 0.18 mL，室温避光旋涡振荡 6 min，无水乙醇为对
+
1.4.3 稳定性测定 照组，734 nm 处测吸光度，按式（3）计算 ABTS •
参考陈博文等 [23] 的实验方法，稍作修改。以样 清除率。
+
品溶液〔将 0.25 mg 山杏核壳黑色素溶于 5 mL 浓度 ABTS •清除率/%=[(A 3 –A 1 +A 2 )/A 3 ]×100 （3）
为 0.1 mol/L 的 NaOH 溶液中；将 0.25 mg 氨基酸修 式中：A 1 为添加样品后溶液的吸光度；A 2 为对照组
饰山杏核壳黑色素溶于 5 mL 水中〕在 500 nm 处的 用无水乙醇代替 ABTS 应用液的吸光度；A 3 为 ABTS
吸光度为指标，考虑到山杏核壳黑色素作为染色剂 应用液起始的吸光度。
参考文献[26]方法并稍作修改。将 0.3 mol/L 的
及食品添加剂的潜在应用场景，结合食品中允许的
醋酸钠缓冲液（pH=3.6）、10 mmol/L 的 TPTZ、
其他食品添加剂的添加量，分别研究温度（20、40、
20 mmol/L 的三氯化铁溶液按体积比 10∶1∶1 配制
60、80、100 ℃）、pH（1.0、3.0、5.0、7.0、10.5
成 FRAP 工作液。取 0.2 mL（质量浓度分别为 0.05、
分别代表强酸性、弱酸性、中性、碱性环境）、金
0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40 g/L）样
属离子（浓度分别为 0、0.05、0.25、0.50、0.75、 品溶液（同质量浓度 V C 溶液为阳性对照）、6 mL
2+
3+
+
2+
1.00 mmol/L 的 Na 、Cu 、Fe 与 Fe ）、食品添加 FRAP 工作液与 0.6 mL H 2 O 混合后，于 37 ℃水浴
剂（质量浓度分别为 0、0.10、0.25、0.50、1.00 g/L 10 min，在 593 nm 处测其吸光度。以质量浓度为
的蔗糖和柠檬酸）对样品稳定性的影响。 0.01~0.06 mg/L 的 FeSO 4 标准溶液代替样品绘制标
1.4.4 抗氧化活性测定 准曲线。根据所测溶液的吸光度和标准曲线回归方
通过测定山杏核壳黑色素及其氨基酸修饰物 程计算得到对应的 FeSO 4 质量浓度（g/L），即为铁
（同浓度 V C 溶液为阳性对照）对 DPPH•、•OH 和 离子还原/抗氧化值（FRAP 值）。
+
ABTS •的清除作用及对铁离子的还原能力来研究 1.4.5 抑菌性能测定
其抗氧化活性。 通过观察黑色素、L-精氨酸-黑色素与 DL-精氨
分别取 0.02 mL 不同质量浓度（0.1、0.4、0.8、 酸-黑色素（后续样品名中黑色素均为山杏核壳黑色
1.2、1.6、1.8、2.0 g/L）样品溶液与 0.18 mL DPPH 素）对大肠杆菌生物膜形成的抑制作用来评价其抑
无水乙醇溶液混匀，室温遮光放置 30 min，无水乙 菌性能 [27] 。在 24 孔板中放入 10 mm×10 mm 的玻璃
醇调零，517 nm 处测溶液吸光度。对照组用无水乙 片 ，每孔分 别加 入 900 μL 大 肠 杆菌菌液
醇代替 DPPH•溶液，空白组用蒸馏水代替样品溶液 [24] 。 （1×10 cfu/mL）及 100 μL（质量浓度为 1.28 g/L）
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按式（1）计算 DPPH•清除率。 黑色素、L-精氨酸-黑色素、DL-精氨酸-黑色素溶液，
