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第 11 期 徐 杰，等: 磁性硅基壳聚糖微球固定化柚苷酶水解柚皮苷 ·1887·
图 1 MSC 微球的制备示意图
Fig. 1 Preparation of MSC microspheres
利用乳液交联法制备 MSC 微球 [15] 。将 0.125 g 别加入 2.0 mL NaOH（1.5 mol/L）、2.0 mL 环氧氯丙烷
磁性硅基纳米颗粒（MS）均匀分散至 10 mL 由体积 体积分数为 50%的水溶液和 2.0 mL NaBH 4 （0.6 g/L）
分数 5.0%的乙酸-水溶液配成的质量分数 2.5%的壳 溶液，在 40 ℃水浴摇床振荡反应 4 h。反应结束后，
聚糖溶液中，逐滴加入含有 60 mL 液体石蜡、1.8 mL 用去离子水反复洗涤直至微球表面没有游离的 OH
吐温 80 组成的乳化液中，在 40 ℃水浴中 800 r/min 和环氧基，得到环氧基修饰的磁性硅基壳聚糖微球
搅拌 30 min 后，加入 2.0 mL 戊二醛，1 h 后用 1 mol/L （MSCE）。检测方法如下：取 3.0 mL 洗涤上清液，
的 NaOH 将体系 pH 调至 9.0，继续反应 1 h。产物 加 1~2 滴酚酞，振荡不变红则无 OH ；再加 3.0 mL
分别用石油醚、乙醇和去离子水洗涤数次，获得磁 硫代硫酸钠（1.3 mol/L），振荡不变红则无环氧基 [17] 。
性硅基壳聚糖微球（MSC），真空干燥备用。 取 5.0 g MSCE，加入 50 mL 柚苷酶酶液，pH
1.2.3 环氧基修饰的磁性硅基壳聚糖微球（MSCE） 调节为 3.0。在 30 ℃、150 r/min 下恒温水浴振荡反
固定化柚苷酶的制备 应 4 h 进行固定化，固定化机制见图 2。反应结束后，
利用改进的方法进行磁性硅基壳聚糖微球 产物用 pH 4.5 的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液（以下简
（MSC）的环氧基修饰 [16] ，修饰机制见图 2。 称“缓冲液”）洗涤数次，布氏漏斗抽干，得到 MSCE
取 0.5 g MSC 微球加入到 50 mL 锥形瓶中，再分 固定化柚苷酶。
图 2 MSCE 固定化柚苷酶的制备示意图
Fig. 2 Preparation abridged general view of MSCE immobilized naringinase
