Page 102 - 《精细化工》2021年第5期
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·956·                             精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 38 卷

                 将 20 mg（0.01 mmol）NH 2 -PEG-NH 2 和 10 mg      100、150、200 mg/L 的 C 60 -Mn-PEG- FA 分散液与细
            C 60 -Mn 分散在 10 mL 去离子水中，加入 20 mg                  胞共同孵育，共同孵育 24 h 后，加入 20 µL MTT（质
            （0.104 mmol）EDC 和 10 mg （0.087 mmol）NHS，           量浓度为 5 g/L）共同孵育 4~6 h 后吸出培养基，加
            并在 24 ℃下反应 24 h，通过截留相对分子质量为                        入 150 µL DMSO；最后，用酶标仪测量每个孔在 570 nm
            3500 Da 透析袋透析 3 d，−40 ℃冷冻干燥 72 h，得                 处的吸光度，并根据式（1）计算细胞活性：
            到 15.1 mg C 60 -Mn-PEG。                                        细胞活性/%=A 1 /A 0 ×100         （1）
                 最后将 FA 15.4  mg（0.035 mmol）和 10 mg            式中：A 1 为材料组的吸光度；A 0 为空白组的吸光度。
            C 60 -Mn-PEG 分散在 10 mL PBS 缓冲溶液（pH=7.5）            1.2.5.2   光动力测试
            中，加入 9.5 mg（0.05 mmol）EDC，在室温避光下反                      将人宫颈癌细胞（HeLa）以每孔 1×10 个细胞
                                                                                                     4
            应 24 h，得到产物先用截留相对分子质量为 3500 Da                     的密度接种到 96 孔板中，在 37 ℃，体积分数为 5%
            的透析袋透析 3 d，−40 ℃冷冻干燥 72 h，得到 14.8 mg               CO 2 的细胞培养箱中培养 24 h 后，加入质量浓度梯
            最终产物 C 60-Mn-PEG-FA。                               度为 0、5、10、20、30、40 mg/L 的 C 60 -Mn-PEG-FA
            1.2.2    C 60 -Mn-PEG-FA 的结构与性能测定                  分散液与细胞共同孵育 3 h，然后在 100 mW/cm 的
                                                                                                          2
                 通过 XPS 对样品中 C、N、O、Mn 元素进行元
                                                               自然光下照射 5 min，更换新鲜培养基继续培养 24 h，
            素分析，以确定材料的元素组成；将质量浓度为0.5 g/L                       最后进行细胞活性测定。
            的 C 60 -Mn-PEG-FA 置入测试池中，利用粒度电位仪                   1.2.5.3   靶向肿瘤光动力治疗测试
            分别测定其水合粒径和 Zeta 电势；将材料与 KBr                            将人宫颈癌细胞（HeLa）和非洲绿猴肾成纤维
            充分研磨后压片，利用傅里叶变换红外光谱仪对其                             细胞（COS 7）以每孔 1×10 个细胞的密度接种到
                                                                                         4
            进行测试；利用紫外-可见分光光度计测定质量浓度                            96 孔板中，在 37 ℃，体积分数为 5% CO 2 的细胞培
            为 0.1 g/L 的样品水溶液的 UV-Vis 谱图。                       养箱中培养 24 h 后，加入质量浓度梯度为 0、5、10、
            1.2.3   溶氧量测定                                      20、30、40 mg/L 的 C 60 -Mn-PEG-FA 分散液与细胞
                 取 1 mL  质量浓度为 1 g/L C 60 -Mn-PEG-FA 水分        共同孵育 0.5 h，然后在 100 mW/cm 的自然光下照
                                                                                               2
            散液加入到 9 mL 10 mmol/L 的 H 2 O 2 溶液中，对照组             射 5 min，更换新鲜培养基继续培养 24 h，最后进行
            为 1 mL 水与 9 mL  10 mmol/L 的 H 2 O 2 溶液的混合溶         细胞活性测定。
            液，通过溶氧仪测定其在 10 min 内的溶氧量，10 s/
            次记录两者的溶氧量数据。                                       2   结果与讨论
            1.2.4  ROS 测定
                                                               2.1  C 60 -Mn-PEG-FA 的 FTIR 分析
                 取 100 µL 新配制的 10 mmol/L DCFH-DA 乙醇
                                                                   图 1 为 C 60 、C 60 -COOH、C 60 -Mn、C 60 -Mn-PEG、
            溶液，加入 0.5 mL 10 mmol/L NaOH 水溶液，室温
                                                               C 60 -Mn-PEG-FA 的 FTIR 谱图。
            避光静置 0.5 h，加入 0.5 mL 0.02 mol/L PBS 缓冲溶

            液，混合均匀得到 DCFH 溶液。在黑色 96 孔板中将
            10 µL 1 mmol/L DCFH 溶液和 20 µL 水分别加入到
            70 µL 具有一定质量浓度梯度的样品 C 60 -Mn-PEG-
            FA 分散液中（5、10、20、30、40 mg/L C 60-Mn-PEG-FA）。
            另一实验组中将 20 µL 水换成 20 µL 1 mmol/L 的
            H 2 O 2 溶液，保持其他条件不变。然后在 100 mW/cm             2
            的自然光下照射 5 min，立刻使用酶标仪监测 96 孔
            板每孔的荧光强度（激发波长为 488 nm，发射波长
            520 nm），以荧光强度的强弱来评估 C 60 -Mn-PEG-FA 在

            光照下产生 ROS 的能力。
                                                               图 1   C 60 、C 60 -COOH、C 60 -Mn、C 60 -Mn-PEG 及 C 60 -Mn-PEG-FA
            1.2.5   细胞实验                                            的 FTIR 谱图
            1.2.5.1   细胞暗毒性测试                                  Fig. 1    FTIR spectra of C 60 , C 60 -COOH, C 60 -Mn, C 60 -Mn-PEG
                                             4
                 首先，在 96 孔板中以每孔 1×10 个细胞的密度                          and C 60 -Mn-PEG-FA

            接种非洲绿猴肾成纤维细胞（COS 7）；然后，在                               由图 1 可知，C 60 本体在 527、576、1187 和 1430 cm –1
            37 ℃，体积分数为 5% CO 2 的细胞培养箱中培养 24 h；                 处有 4 个显著的特征吸收峰，当其键合上羧基后，
                                                                         –1
            分别加入质量浓度梯度为 0、10、20、40、60、80、                      在 1620 cm 处新的吸收峰归属于 C==O 的伸缩振
   97   98   99   100   101   102   103   104   105   106   107