Page 114 - 《精细化工》2021年第7期

·1396· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 38 卷

性金黄色葡萄球菌（S. aureus）于 37 ℃，在肉汤琼 镜下观察。
8
脂培养基中培养 12 h，使两种细菌浓度达到 1.0×10
2 结果与讨论
cfu/mL，然后加入 1.5 g 用酒精和紫外线消毒过的不
同 TC 负载量的 P(NAGA 20-IA 1)@TC 分别培育 45 min
2.1 FTIR 分析
与 3 h 时进行抗菌测试。取培养好的 50 μL 菌液，
对所合成的单体NAGA及其共聚物P(NAGA 20 -IA 1 )
均匀涂布于固体培养基上，37 ℃培养 24 h 后，统 1
进行了 FTIR 和 HNMR 表征，见图 1。
计培养基上的菌落数，以加空白水凝胶的菌液为对

照组。抗菌率计算按式（6）进行计算：
W r / %=〔(W b – W e )/W b 〕100 （6）
式中：W r 为抗菌率，%；W b 为空白（未载药凝胶对
照组）菌落数，个；W e 为实验组菌落数，个。
1.3.6 水凝胶细胞毒性测试
选择小鼠成纤细胞 L929 作为实验细胞，将其培
养于体积分数为 10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素和
100 U/mL 链霉素的 DMEM 高糖培养基中，并保持
细胞培养箱的环境为 37 ℃、体积分数 5% CO 2 。将
制备好的水凝胶〔所用水凝胶为 P(NAGA 20 -IA 1 )及
P(NAGA 20 -IA 1 )@TC〕裁剪为直径为 1 mm 的圆片，
并将其置于超净台中并在紫外光照下过夜。将水凝
胶片在 3 mL DMEM 高糖培养基浸泡，将浸提液每
孔 150 μL 加入到每个实验组。
1.3.6.1 MTT 法检测
当细胞融合率达到 80%~90%时，将用胰蛋白酶
消化后的细胞用 DMEM 培养基稀释，得到含有细胞
的悬浮液。在放置有水凝胶片的 96 孔板中每孔小心
滴加 150 μL 细胞悬浮液，置于恒温培养箱中培养。
培养 24 h 时，吸去培养液并加入 100 μL 新鲜培养
1
图 1 NAGA 和 P(NAGA 20 -IA 1 )的 FTIR（a）及 HNMR
基和 20 μL MTT，再恒温孵育 4 h。最终用 150 μL 谱图（b）
二甲基亚砜（DMSO）替换孔板中的混合液，摇晃 Fig. 1 FTIR (a) and HNMR (b) spectra of NAGA and
1
均匀，以保证底部的紫色结晶完全溶解于 DMSO 中。 P(NAGA 20 -IA 1 )

用酶标仪测定每孔在波长 530 nm 处的吸光度，记为
–1
由图 1a 可知，3390、3316、3192 cm 处的吸
S（实验组），而空白对照组（只有同种浓度细胞和
收峰归属于 NAGA 上氨基的伸缩振动，羰基的 C==O
DMEM 的空白对照组）的记为 C（对照组）。分别
–1
的伸缩振动位于 1660 cm ，C—N 的伸缩振动峰出
对空白组、空白凝胶组（GEL）、不同负载量的载药
–1
–1
现在 1553 cm 。P(NAGA 20 -IA 1 )在 1627 cm 处的
凝胶（GEL@TC1%、GEL@TC5%、GEL@TC10%、
C==C 特征吸收峰消失，说明 NAGA 与 IA 发生了自
GEL@TC15%、GEL@TC20%）的吸光度进行测定。
由基共聚。
细胞存活率按式（7）进行计算：
由图 1b 可知，NAGA 单体的亚甲基的质子峰的
W / % = A S / A C  100 （7）
化学位移出现在 3.8 左右，碳上质子的自旋偶合从
式中：W 为细胞存活率，%；A C 为空白（未载药凝
而产生了吸收峰能级裂分的现象，隶属于特殊的
胶对照组）吸光度；A S 为实验组吸光度。
n+1 规则，从而产生一个 6 重峰和 2 重峰的组合情
1.3.6.2 二乙酸荧光素（FDA）荧光染色 [9]
5
在培养皿中接种浓度为 1.0×10 个/mL 的小鼠 况 ，以上结果说明，NAGA 已合成成功。另外，
5
成纤细胞 L929，加入 1 mL 1.0×10 个/mL 下细胞的 化学位移在 6 左右的 C==C 键上的质子氢消失了，
说明该双键分裂而发生聚合，以上结果表明，共聚
DMEM 溶液，接种后让其贴壁生长 24 h，再倒去旧
物 P(NAGA 20 -IA 1 )合成成功。
的 DMEM 培养液，装入不同变量的浸提液 1 mL，
2.2 水凝胶的相对分子质量与 UCST
再培养 24 h。向培养皿中加入 20 μL 的 FDA/丙酮溶
不同单体物质的量比共聚物 P(NAGA-IA)的相
液（5 g/L），暗反应 10 min 后，置于正置荧光显微