Page 88 - 《精细化工》2022年第9期
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·1806·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 39 卷

            些相对明显的劣势，比如需要复杂的检测流程，耗                             1   实验部分
            时费力；依赖高价值的医疗设备，难以普及；检测
            限较高，不能直接检测肝素等。随着近几年荧光材                             1.1   试剂与仪器
            料的发展，利用荧光探针方便及快捷的优势，开发                                 三苯基溴基乙烯（AR）、4-羧基苯硼酸（AR）、
            出了不同类型的荧光检测肝素的方法                  [12-13] 。比如，     四（三苯基膦）钯〔Pd(PPh 3 ) 4 〕（AR）、碳酸钾（AR）、
            BAYRAKTUTAN 等      [14] 通过荧光素染料检测肝素，               四丁基溴化铵（TBAB，AR）、磷酸钠（AR）、焦磷
            CAO 等   [15] 利用量子点检测肝素以及 LIU 等          [16] 利用    酸钠（AR）、硫酸钠（AR）、肝素钠（185 USP
            荧光抗生素来检测肝素等。但是，这些荧光探针都                             units/mg）、羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖（取代度
            存在聚集产生猝灭(ACQ)现象，因而限制了其进一                           98%）、透明质酸（HA，质量分数 97%），上海麦
            步的应用。                                              克林生化科技有限公司。四氢呋喃，分析纯，国药
                 唐本忠院士在 2001 年首次提出聚集诱导发光                       集团化学试剂有限公司。魔芋葡甘聚糖（KGM），
            概念（AIE）     [17] ，为使用高浓度荧光材料而又避免                   湖北一致魔芋生物科技有限公司。葡聚糖（相对分
            ACQ 现象开辟了新的途径。与 ACQ 相反，AIE 分                       子质量 1500）、淀粉，牛血清蛋白（BSA），化学纯，
            子在稀溶液中显示弱荧光或者不发荧光，但在聚集                             上海阿拉丁生化科技股份有限公司。澳洲胎牛血清
            状态下由于分子内旋转受限而发射出明显增强的荧                             (FBS500-S)，北京智杰方远科技有限公司。
            光。由于 AIE 分子制备简单、具有良好的光稳定性                              Nicolet Avatar 370 型傅里叶变换红外光谱仪
            并且易于功能化等优点，所以具有 AIE 性质的荧光                          （FTIR），美国 Thermo 公司；AS400 型核磁共振波
            材料日益受到关注。在此背景下，科研人员开发了                             谱仪，瑞士 Bruker 公司；Zeta sizer Nano S90 电位
            一系列关于检测肝素的荧光探针。比如，LIU 等                     [18]   分析仪，英国 Malvern 公司；Hitachi F-4600 荧光分
            设计基于金属有机骨架的荧光分子用于检测肝素，                             光光度计，日本 Hitachi 公司；UV-2600 紫外分光光
            APARNA 等   [19] 利用铜纳米簇检测肝素，QIAO 等           [13]   度计（UV），日本 Shimadzu 公司；FEI F20 透射电
                                                               子显微镜（TEM），美国 FEI 公司。
            将聚电解质诱导芘准分子用于检测肝素。但是，将
            AIE 物质和壳聚糖相结合用来检测肝素的研究还鲜                           1.2   复合物的构建
                                                               1.2.1   荧光体 TPE-COOH 的合成
            见报道。
                                                                   按照文献方法合成 TPE-COOH          [25] ，具体合成路
                 壳聚糖是一种天然多糖，在自然界中广泛存在，
                                                               线如下所示。
            由于其具有良好的生物相容性及可降解性而受到了

            人们的密切关注。壳聚糖的每一个重复单元中都含
            有大量的羟基和氨基，易于化学修饰，并且化学改
            性不会破坏其原有的主链结构且可保持原有的多糖特
            性，所以壳聚糖的改性具有十分重要的研究价值                     [20-21] 。
            例如，LIN 等    [22] 制备水溶性壳聚糖-量子点混合纳米
                                                                   在 N 2 保护下，将三苯基溴基乙烯（1.1 g，3.2 mmol）
            球用作生物成像和生物标记，MOUSSA 等                 [23] 使用荧
                                                               和 4-羧基苯硼酸（0.82 g，4.9 mmol）溶于 55 mL 四
            光标记的真菌壳聚糖作为生物防治的抗菌剂，LAI                            氢呋喃（THF）中，然后加入四丁基溴化铵（0.02 g，
            等 [24] 利用壳聚糖修饰的硫化镉量子点作为荧光探针
                                                               0.06 mmol）和 10 mL 碳酸钾水溶液（2 mol/L）。反
            用于测定铜（Ⅱ）离子。虽然如此，用 AIE 分子修                          应体系在 55  ℃下混合搅拌 0.5 h 后，再将四（三苯
            饰壳聚糖的研究鲜见报道。
                                                               基膦）钯（0.01 g，0.0087 mmol）加入混合物中，
                 在本工作中，首先通过一步合成制备了具有                           加热至 90  ℃，回流 24 h。用水淬灭反应，然后用
            AIE 性质的 4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲酸（TPE-                   乙酸乙酯萃取出粗产物，再用无水硫酸钠干燥有机
            COOH），然后，在弱碱性条件下利用带有大量正电                           相并先通过柱层析法纯化，最后用硅胶板二次纯化
            荷的壳聚糖季铵盐与之相结合来增强其 AIE 效应，                          (洗脱液为二氯甲烷和正己烷，二者体积比为 1∶1)。
            再利用具有高负电荷的肝素与壳聚糖季铵盐静电结                             产品为淡黄色粉末，收率 78.02%。
            合，从而释放出低负电荷的 AIE 发光体，进而导致                          1.2.2  TPE-COOH/壳聚糖季铵盐复合物的制备
            体系荧光强度减弱，并将其用于肝素的检测。采用                                 将羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖（0.07 mg）溶于
            傅里叶变换红外光谱仪、核磁共振波谱仪、荧光分                             磷酸盐缓冲液（PBS，pH=7.4，1.6 mL）中，再加入溶
            光光度计、电位分析仪等对相关产物进行了表征和                             于 DMF（0.4 mL）的 TPE-COOH（0.019 mg，0.05 μmol）
            分析。                                                溶液。将样品放置于振荡器中振荡 2 min 即得到
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