Page 89 - 《精细化工》2022年第9期

第 9 期 刘 伟，等: 壳聚糖基聚集诱导发光复合物用于肝素检测 ·1807·

TPE-COOH/壳聚糖季铵盐复合物。 峰，这是 TPE-COOH 中芳香环的特征伸缩振动，与
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1.3 测试方法 文献报道一致 [26] 。图 1b 为 TPE-COOH 的 HNMR
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1.3.1 傅里叶变换红外光谱测定 谱图。相关结果如下：HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ),
采用溴化钾压片法测试样品的红外光谱。测试 δ: 12.88 (s, 1H), 7.72 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.22 ~ 7.07
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范围在 4000~500 cm 。 (m, 11H), 7.01 (dt, J = 7.3、1.9 Hz, 6H)。在 δ12.88
1.3.2 微观形貌 处吸收峰归属于 1 位上氢原子的共振；在 δ7.72 处
吸收峰对应于 2, 3 位氢原子的共振；在 δ7.22~7.01
将样品超声 10 min，然后用滴管取样滴于铜网
处吸收峰是由于 4~20 位上氢原子的共振所引起，该
上，自然晾干后，用 TEM 观察。
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结果与文献报道一致 [26-27] 。FTIR 和 HNMR 都证实
1.3.3 Zeta 电位
了目标产品的成功合成。
将不同浓度梯度的样品在 2 mL V(DMF)∶V(H 2 O)=

1∶4 溶液中分散均匀，超声 10 min 后，装入测试皿
中，室温下测试其电位值。测三次取平均值。
1.3.4 荧光光谱测定
将不同浓度梯度样品在 2 mL V(DMF)∶V(H 2 O)=
1∶4 溶液中分散均匀，振荡 2 min，装入比色皿中，
室温下测试其发射光谱。激发波长：340 nm，激发
狭缝宽度和发射狭缝宽度分别为 5 nm，扫描范围在
350~650 nm。
1.3.5 紫外光谱测定
将不同浓度梯度样品在 2 mL V(DMF)∶V(H 2 O)=
1∶4 溶液中分散均匀，振荡 2 min，装入比色皿中，
室温下测试其吸收光谱。扫描范围在 255~445 nm。
1.4 肝素的检测
将肝素或干扰物（磷酸钠、焦磷酸钠、硫酸钠、
牛血清蛋白、透明质酸、淀粉、魔芋葡甘聚糖及葡
聚糖）分别用 10 mmol/L PBS （pH=7.4）缓冲溶液
配制为 500 mg/L 的待测溶液。然后，取 70 μL 待测
溶液加入 1.93 mL 复合物体系中，通过荧光分光光

度计来对肝素进行检测（荧光强度的变化与肝素含
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图 1 TPE-COOH 的 FTIR（a）及 HNMR 谱图（b）
量有关）。另外，取 20 μL 牛血清加入 1.98 mL 复合 1
Fig. 1 FTIR (a) and HNMR (b) spectra of TPE-COOH
物体系待测液中，用于实际样品中肝素的检测。
1.5 探针检测限的计算 2.2 TPE-COOH 的 AIE 效应
TPE-COOH/壳聚糖季铵盐复合物对肝素的检 本工作的 AIE 分子在良性溶剂（疏水溶剂）中
测限(LOD，mg/L)根据公式（1）计算： 发弱光或不发光，但是随着不良溶剂（亲水溶剂）
LOD = 3σ/k （1） 的增加其荧光逐渐增强。图 2A 为 TPE-COOH 在水
式中：σ 表示不加目标物肝素时空白探针（TPE- 不同体积分数的 DMF/H 2 O 溶液中的荧光发射光谱。
COOH 浓度为 25 μmol/L，壳聚糖季铵盐质量浓度为 由图 2A 可见，当 H 2 O 体积分数≤40%时，其荧光
35 mg/L）的荧光强度标准偏差；k 表示探针在线性 强度都很低，曲线几乎重合。但是随着不良溶剂 H 2 O
范围（0~14 mg/L）内的斜率。 的继续加入，其在 467 nm 处的荧光发射强度逐渐增
强，这正是 AIE 分子的特有荧光性质 [28] 。图 2B 为
2 结果与讨论
TPE-COOH 在水不同体积分数的 DMF/H 2 O 溶液中
2.1 TPE-COOH 的结构表征 的紫外光照照片。从图 2B 可以看出，当 H 2 O 体积
图 1a 为 TPE-COOH 的红外光谱图。从图 1a 可 分数≤40%时，紫外光照照片很暗，说明其荧光强
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以看出，在 1692 cm 处出现了一个很强的吸收峰， 度很弱；但当 H 2 O 体积分数高于 40%时，其照片很
这归属 TPE-COOH 中 C==O 的伸缩振动所致；在 亮，说明其荧光强度很强，这一现象与文献报道一
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3435 cm 处出现一个宽峰，这是由 O—H 的伸缩振 致 [29] 。TPE-COOH 在 DMF 中溶解性较好，但在 H 2 O
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动引起；另外，在 1599 和 700 cm 处出现两个吸收 中溶解性较差，因此随着混合液中 H 2 O 含量逐渐升