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第 10 期 匡新谋，等: 缬氨酸薄荷酯的制备及其生物活性 ·1693·

为生理盐水组（NS，含体积分数为 0.5%的吐温–80）、 组表现出与卡马西平组一致的抗惊厥效果。因此，
阳性对照组（卡马西平 Carbamazepine 50 mg/kg，含 BHX 在 MES 模型上，当小鼠的 BHX 进药量为
体积分数为 0.5%的吐温–80）、化合物组（100 mg/kg， 100 mg/kg 时，同生理盐水组及卡马西平组相比，具
含体积分数为 0.5%的吐温–80）。分别于小鼠腹腔注 有与卡巴列平类似的抗癫痫活性。
射药物，并分别于 0.5、1、2、3、4 h 后记录小鼠出
①
表 1 BHX 的小鼠初期抗惊厥实验结果 ip (Dose of
现后肢强直的数量即为惊厥数，初步评价药物的抗
100 mg/kg)
惊厥活性。 Table 1 Mice initial anticonvulsive test results of BHX ip
①
1.4 体外抑制 HeLa 细胞活力实验 (Dose of 100 mg/kg)
②
参照文献[17]方法对 HeLa 细胞进行培养：将 剂量 MES

HeLa 细胞置于含有体积分数为 10%的胎牛血清的 /(mg/kg) 0.5 h 1 h 2 h 3 h 4 h
③
④
DMEM 培养基中，在 37 ℃、CO 2 体积分数为 5%、 生理盐水 — 0 /4 0/4 0/4 0/4 0/4
饱和湿度的培养箱中培养，维持细胞处于对数生长 卡马西平 50 3/4 2/4 1/4 0/4 0/4
期备用。将 BHX 溶解在 DMSO 中，并分别加入 HeLa BHX 100 2/4 2/4 1/4 0/4 0/4
细胞中至终浓度为 0.05 mol/L，分别在不同时间点 注：①受试化合物加吐温–80 后用水溶解，腹腔给药；②在腹腔
注射给药后 0.5、1、2、3、4 h 进行最大电惊厥实验；③保护小
每隔 24 h 统计肿瘤细胞生长情况。对照组细胞只添
鼠只数；④测试小鼠数量为 4 只。
加 DMSO。
参照文献[18]进行细胞密度值统计：在 24 孔细 癫痫的发病机制目前有很多，有研究表明癫痫
胞培养板上加入对数生长期 HeLa 细胞混悬液(细胞 与免疫机制有关，国内外诸多的癫痫免疫学与临床
4
密度为 5×10 个/mL)，每孔 1.0 mL；培养 1 d 后加 研究中证实，癫痫发作患者存在免疫功能异常、免
[4]
入对照品及实验样品，每孔 1.0 mL，均设 3 个复孔。 疫功能低下等 [20] 。缬氨酸具有改善免疫机能作用 ，
在加药同时及加药后不同时间，用体积分数为 薄荷也具有抗炎镇痛、抗病毒等药理作用等 [21-22] 。
0.25%的胰酶液消化，收集细胞于细胞计数板上计 因此，BHX 可能改善了小鼠的免疫功能，进而使
数，计数值即为细胞密度值。参照文献[19]方法对 BHX 具有抗癫痫活性。
细胞增殖抑制率进行计算，计算式如下： 2.3 BHX 抑制肿瘤细胞增殖能力
抑制率/%=(1–A/B)×100 利用细胞生长曲线方法对 BHX 抑制 HeLa 细胞
式中：A 为实验组细胞密度值；B 为对照组细胞密 体外活性进行了研究。分别统计对照组及 BHX 组第
度值。 1~3 d 的 HeLa 细胞增殖情况，分别统计 3 次取平均
数并计算其标准差，结果见图 1。
2 结果与讨论

2.1 BHX 结构表征
–1
IR(KBr)，ν/cm : 3403.74(—NH 2 )、2955.18(—
CH 3 )、2927.68 (—CH 2 )、1739.55(C=O)、1286.96(C—
O)、1233.20(C—O)。
1 HNMR(DMSO-d 6 , 400MHz)，δ:0.3~2.5[25H，
其中 7 个为缬氨酸异丙基上的氢，18 个为薄荷上氢；
4.0(d,1H,NH 2 —CH)；5.0[m，1H，(CH 2 ) 2 —CH—O]；
8.5~9.0（2H，—NH 2 ）。
+
ESI–MS(m/Z): 256.2[M+H] 。
图 1 BHX 抑制肿瘤细胞增殖能力
上述数据与文献[13]报道数据基本一致，再结
Fig. 1 Inhibition of HeLa cell growth by BHX
合质谱数据，得出产物为 BHX。
2.2 BHX 抗癫痫活性 由图 1 可知，加药前（记为第 0 d），对照组和
BHX 的小鼠初期抗惊厥实验结果见表 1。 BHX 组的细胞数量基本相同，随着 BHX 处理时间
由表 1 可知，当测试小鼠数量均为 4 只时，在 的延长，BHX 显著抑制 HeLa 的增殖，加药后第
0.5 h 时，卡马西平组保护小鼠只数为 3 只，BHX 组 1~3 d，BHX 组细胞数量分别为对照组的 97.8%、
受保护小鼠只数为 2 只，BHX 组表现出的抗惊厥效 43.4%、67.5%，抑制率分别为 2.2%、56.5%、32.5%，
果比卡马西平组稍差。然而，随着时间的延长，BHX 抑制率最高达到 56.5%。由此可知，BHX 具有明显