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第 7 期                    祁小妮，等:  微波辅助骨碎补黄酮的提取及抗氧化活性研究                                   ·1171·


                 骨碎补（Drynaria rhizome）为水龙骨科植物槲                 硝酸钠、正丁醇、乙醚、硝酸铝、氢氧化钠、丙酮、
            蕨〔 Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm 〕及 中华 槲 蕨          维生素 C、硫酸亚铁、水杨酸、过氧化氢（质量分
            〔Drynaria baronii(Christ) Diels〕的干燥根茎    [1] 。由    数 30%）、邻苯三酚、Tris-盐酸、浓盐酸，以上均为
            于在临床上其经常用于跌打损伤病症的治疗，因此                             试剂纯，购于兰州龙腾盛世化学试剂有限公司；芦
            得名骨碎补。骨碎补的化学成分以二氢黄酮和糖苷                             丁：生化试剂，购于国药集团化学试剂有限公司。
                         [2]
            类化合物为主 。在中西医临床上其对症治疗肾亏                                 UV1600-双光束紫外-可见分光光度计（上海美
            阴虚、耳鸣耳聋、牙齿掉落、跌打损伤及骨裂骨折                             普达仪器有限公司）。
                   [3]
            等病症 。然而，有关骨碎补中黄酮的有效提取及                             1.2   方法
            相应产品的综合开发利用还处在起步阶段。                                1.2.1   骨碎补黄酮提取工艺的单因素实验设计
                                                                   在微波功率和微波时间确定的基础上，考察不
                 根据已有的文献报道，提取黄酮类化合物的研
                                    [4]
            究方法较多，如，刘晓娇 等人考察了商洛产粗榧                             同的原料质量浓度（0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 g/L）
                                                               对黄酮提取率的影响；在微波功率和原料质量浓度
            叶中总黄酮的提取工艺和抗氧化活性，结果表明，
                                                               确定的基础上，考察微波时间（4、6、8、10、12 min）
            采用正交实验得出黄酮提取率与提取因素之间的非
                                                               对提取率的影响；在微波时间和原料质量浓度确定
            线性关系，虽然确定了最佳的黄酮提取因素组合，
                                                               的基础上，考察微波功率（160、320、400、480、
            但是仍存在考察不彻底、不全面等缺点，对两两因
                                                               640 W）对提取率的影响。
            素之间的交互作用不能通过正交实验给出明确的结                             1.2.2   骨碎补黄酮的提取实验
                                 [6]
                      [5]
            果；李彩霞 等、王明艳 等人分别研究了“黑美人”
                                                                   取粉碎的骨碎补 5 g，加入乙醇作为提取溶剂，
            土豆黄酮和毛冬青根黄酮的提取工艺，尽管二者都
                                                               得到料液比为 0.03 g/L 的提取体系。将体系摇匀静
            采用了响应曲面法对因素与提取率之间的二次函数
                                                               置 24～48 h 后，在微波功率 400 W、时间 10 min 条
            模型进行优化，得到了最佳的因素水平组合，但是，                            件下，提取骨碎补黄酮。提取完成后，利用循环水
            提取率仍然较低，分别为 1.03%、0.419%。由于微                       浴真空泵快速抽滤，将乙醇通过旋转蒸发回收，固
            波辐射能够加速有效物质的快速溶出，可以间接提                             体加入蒸馏水搅拌 30 min 左右，离心或静置，取上
            高黄酮的提取效率，因此，采用微波辅助提取黄酮                             层清液，留存备用        [12] 。其他料液比、微波功率和微
                                                       [7]
            类化合物，有望提高黄酮的提取效率。李志平 等                             波时间下骨碎补黄铜的提取实验方法同上。
            人采用微波辅助法提取柿叶黄酮，提取率最高达                              1.2.3   骨碎补黄酮含量测定方法
                          [8]
                                          [9]
            25.1%；马燕燕 等人以及赵文红 等人分别采用响                              采用比色法     [13] 进行黄酮含量的测定，具体步骤
            应面优化酶法和热水法提取柿叶黄酮，最高提取率                             参照文献[14-15]：准确量取 1 mL 样品液于 50 mL 容
            分别为 2.47%和 6.12%；另外，卢润双             [10] 等人采用      量瓶中，加入体积分数为 60%的乙醇至 6 mL，加入
            微波辅助法提取山楂黄酮的提取率最高，为 8.02%。                         质量分数为 5%的 NaNO 2 溶液 1 mL，摇匀，静置 6 min，
            霍红   [11] 等人 采用乙醇提取柿叶黄酮的提取率为                       加入质量分数为 10%的 Al(NO 3 ) 3 溶液 1 mL，摇匀，
            4.31%。所以，采用微波辅助提取黄酮，比热水提取                          静置 6 min，加入质量分数为 4%的 NaOH 溶液 10 mL，
            和乙醇提取等其他方法的提取效率高。                                  最后用体积分数为 60%的乙醇溶液定容，并摇匀，
                 因此，为了提高黄酮的提取率，且能够全面分                          静置 15 min。以不含黄酮的空白试剂作为对照，以芦
                                                               丁为标准品，在 510 nm 下测定芦丁标准品及样品的
            析提取因素之间的交互作用，避免正交实验出现的
                                                               吸光度，以吸光度为纵坐标，以芦丁质量浓度为横
            因素分析不全等问题。本文采用微波辅助结合响应
                                                               坐标绘制标准曲线，然后根据芦丁标准曲线求得黄
            曲面优化法，对骨碎补黄酮提取中的原料质量浓度、
                                                               酮的提取率。黄酮提取率计算公式如下。
            微波功率及微波时间进行了优化，以期能够得出最
                                                                       黄酮提取率/%=(ρ×V×D)/m×100
            佳的因素水平组合，获得较高的提取效率。考察了
                                                               式中：ρ为提取液中骨碎补黄酮的质量浓度，g/L；
            骨碎补黄酮在人工模拟的体外环境下对自由基的清
                                                               V 为提取液的体积，mL；D 为稀释倍数；m 为原料
            除能力，以说明其抗氧化活性，为骨碎补黄酮功能
                                                               干重，g。
            产品的研发提供实验依据。
                                                               1.2.4   骨碎补黄酮响应曲面实验设计方案
                                                                   以单因素实验为基础，选择最优的单因素作为
            1    材料与方法
                                                               响应曲面优化的基础影响因素，根据 Box-Behnken
            1.1    材料、试剂与仪器                                    设计  [16] 结合中心实验组合原理        [17] ，确定骨碎补黄酮
                 骨碎补：购自于甘南中药材大药房，乙醇、亚                          提取率与影响因素之间的水平组合，实验设计结果
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