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·1172· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 35 卷

如表 1 所示。 2 结果与分析

表 1 实验因素及水平 2.1 芦丁标准曲线绘制
Table 1 factors and levels of test 芦丁标准曲线见图 1。

水平

–1 0 1
A 原料质量浓度/（g/L） 0.01 0.03 0.05
B 微波功率/W 320 480 640
C 微波时间/min 8 10 12

1.2.5 骨碎补黄酮抗氧化活性测定
1.2.5.1 羟基自由基（OH·）清除能力测定
参考 Fenton 反应体系模型 [18-20] ，在 9 mmol/L
的水杨酸-乙醇溶液中 （乙醇作为溶剂），加入

9 mmol/L FeSO 4 ，再加入 8.8 mmol/L H 2 O 2 ，生成具 图 1 芦丁标准曲线
有强氧化活性的反应体系。然后，加入不同质量浓 Fig. 1 Standard curve of Rutin

度的骨碎补黄酮溶液，与显色剂水杨酸竞争羟基自
黄酮类化合物的测定以芦丁为标样，根据芦丁
由基，从而使反应体系的吸光度减小。采用固定反
标准品质量浓度与对应吸光度绘制标准曲线，计算
应时间法，在相同体积的反应体系中加入不同质量
骨碎补黄酮的含量。通过线性回归方程可知，芦丁
浓度的骨碎补黄酮溶液，用蒸馏水作为空白试剂，
标准品的线性范围为 0.01~0.05 mg/L。吸光度与质
在波长 510 nm 处测吸光度，以羟基自由基的清除率 量浓度之间具有较好的线性关系（R =0.9794）。
2
为抗氧化活性指标 [21-22] ，以同质量浓度的维生素 C 2.2 单因素实验结果分析
作为阳性对照，骨碎补黄酮对羟基自由基的清除率 2.2.1 原料质量浓度对骨碎补黄酮提取率的影响
按下式计算。 按照 1.2.2 节方法进行实验，考察了不同原料质
清除率/%=[1－(A 1 －A 2 )/A 3 ]×100 量浓度对骨碎补黄酮提取率的影响，结果见图 2。
式中：A 1 为加入骨碎补黄酮溶液后溶液的吸光度；
A 2 为以蒸馏水代替显色剂水杨酸的吸光度；A 3 为以
蒸馏水代替骨碎补黄酮的空白组的吸光度。
2–
1.2.5.2 过氧负离子自由基（O 2 ·）清除能力测定
根据黄酮清除过氧负离子自由基的原理，结合
已有的文献报道 [23-24] ，采用邻苯三酚（焦性没食子
酸）在自身氧化过程中产生的过氧负离子自由基作
为反应体系的目标靶物质。具体操作为：取 8 支具塞
的 10 mL 比色管，贴上标签，首先加入 4.5 mL、
0.1 moL/L Tris-HCl 缓冲液（pH=8.2），再分别加入

0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 g/L 不同质量浓度的 图 2 原料质量浓度对黄酮提取率的影响
黄酮溶液各 1 mL，混匀，25 ℃静置 10 min，加入 Fig. 2 Effect of mass concentration of raw material on the
extraction yield of flavonoids
反应试剂焦性没食子酸 0.1 mL、继续加入浓盐酸

（12 moL/L）0.1 mL，终止反应。在特征吸收波长
从图 2 可以看出，当原料质量浓度从 0.01 g/L
（330 nm）处测定不同质量浓度溶液的吸光度。以
增加至 0.03 g/L 时，总黄酮的提取率增加明显，在
不加焦性没食子酸的实验组作为空白，以不加黄酮 原料质量浓度为 0.03 g/L 时达到最大值，为 5.42%，
2–
的反应组作为对照。骨碎补黄酮对 O 2 ·的清除率按 继续增加原料的质量浓度，黄酮的提取率反而减小。
下式计算。 原因可能是，在其他操作条件一定时，适当增大原
清除率/%=(A 0 －A i )/(A 0 －A)×100 料质量浓度有利于黄酮溶出，但是继续加大原料质
式中：A 0 为对照组的吸光度；A 为空白组的吸光度； 量浓度，微波内加热作用和超声波空化作用反而降
A i 为加入黄酮的实验组吸光度。 低，即细胞膜和细胞壁破碎效果减弱，黄酮溶出减