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·172· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 36 卷

随着 n(ASA)/n(SPI-NH 2 )的增加，上述吸收峰的强度 吸收峰。随着 n(ASA)/n(SPI-NH 2 )的增加，在 210 nm
显著增强，这一现象进一步证实了酰化反应成功进 处的吸收峰发生红移，且 279 nm 处的吸收峰强度呈
行，在 SPI 骨架上生成新的酰胺键（—NH—CO—)， 增加趋势。上述现象的原因可归结如下：酰化反应
并且引入大量的烷基链。 的成功进行在 SPI 分子骨架上生成新的酰胺键及引
2.3 荧光光谱分析 入长链疏水基团，SPI 肽键（酰胺键）的微环境发
SPI 存在色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸残基，它 生改变，导致肽键吸收峰强度出现红移现象 [23] ，此
们含有苯环结构或共轭双键，所以 SPI 具有内源荧 外，引入的长链疏水基团中含有不饱和双键对色氨
光特性，其中又以色氨酸的荧光强度最显著 [21] 。SPI 酸残基吸收峰有一定的增色效应。
和 ASA x -SPI 的荧光图谱见图 3。

图 4 SPI(a)、ASA 0.5 -SPI(b)、ASA 1 -SPI(c)、ASA 1.5 -SPI(d)
图 3 SPI(a)、ASA 0.5 -SPI(b)、ASA 1 -SPI(c)、ASA 1.5 -SPI(d) 和 ASA 2 -SPI(e)的 UV-Vis 光谱
和 ASA 2 -SPI(e)的荧光光谱 Fig. 4 UV-Vis spectra of SPI(a), ASA 0.5 -SPI(b), ASA 1 -
Fig. 3 Fluorescence spectra of SPI(a), ASA 0.5 -SPI(b), SPI(c), ASA 1.5 -SPI(d) and ASA 2 -SPI(e)
ASA 1 -SPI(c), ASA 1.5 -SPI(d) and ASA 2 -SPI(e)
2.5 疏水指数分析
如图 3 所示，随着 n(ASA)/n(SPI-NH 2 )的增加， ANS 探针在水溶液中荧光量子产率低，当与蛋
ASA x -SPI 的荧光强度显著增强。这是因为 ASA 含 白质的疏水基团结合时其荧光量子产率急剧升高 [24] ，
有不饱和双键，增加 ASA 用量将提高酰化度，即 [25]
常用于蛋白质表面疏水性测定 。SPI 和 ASA x -SPI
ASA x -SPI 分子中不饱和双键数量增加，共轭效应增
的疏水指数见图 5。
强，进而荧光强度增强。同时亦可发现，当 n(ASA)/
n(SPI-NH 2 )超过 1.5 时，荧光强度趋于稳定，这一规
律与上文 2.1 酰化度的研究结果相符。
另外，根据文献[22]表明色氨酸残基微环境具
有以下特点：当最大发射波长位于 330 nm 附近时，
色氨酸残基处于完全疏水环境；当最大发射波长位
于 340 nm 附近时，色氨酸残基部分暴露于水中；当
最大发射波长位于 350 nm 附近时，色氨酸残基完全
暴露于水中。如图 3 所示，SPI 的最大发射波长位

于 334 nm 附近，意味着色氨酸残基处于疏水环境，
图 5 SPI 和 ASA x -SPI 的疏水指数
并且随着 n(ASA)/n(SPI-NH 2 )增加，最大发射波长向
Fig. 5 Hydrophobicity index of SPI and ASA x -SPI
低波长迁移，表明酰化反应导致 ASA x -SPI 的色氨酸
残基趋向于更加疏水的状态。这是因为 ASA 富含疏 如图 5 所示，未酰化改性的 SPI 的疏水指数仅
水烷基链，酰化反应在 SPI 骨架上引入了大量的 为 27，随着 n(ASA)/n(SPI-NH 2 )增加，ASA x -SPI 的
ASA 疏水烷基链。 疏水指数明显增大，最大疏水指数可达 62(ASA 1.5 -
2.4 UV-Vis 分析 SPI)。这是因为酰化反应在 SPI 骨架上引入长链烷
SPI 和 ASA n -SPI 的 UV-Vis 图谱见图 4。 基(疏水基团)，酰化度越大，引入疏水基团的数目
如图 4 所示，在 200~320 nm 波长范围内，SPI 越多，故而疏水指数越大。当 n(ASA)/n(SPI-NH 2 )
存在两个吸收峰，一个是 210 nm 处蛋白质肽键的强 超过 1.5 时，酰化度趋于稳定，因此疏水指数没有
吸收峰，另一个是在 279 nm 处色氨酸残基产生弱的 明显变化。