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第 3 期 王 东，等: 咖啡酰氨基酸乙酯的合成及其抗氧化活性 ·497·

C==CH)，4.57 (s，1H，ArH)，4.50 (s，1H，ArH)， (m，2H，OCH 2 )，1.97 (s，2H，CH 2 )，1.19 (t，J =
+
4.36 (s，1H，ArH)，4.02 (s，2H，OCH 2 )，2.70 (s， 11.1 Hz，3H，CH 3 )。ESI-MS [M+H] ，m/Z：实测
1H，CH)，2.46 (d，J= 13.5 Hz，3H，CH 3 )，1.91~1.84 值（计算值）：372.0484（371）。
(m，3H，SCH 3 )，1.12 (s，4H，CH 2 +CH 2 )。ESI-MS 2.3 DPPH 自由基清除活性测定
+
[M+H] ，m/Z：实测值（计算值）：340.28（339）。 咖啡酰氨基酸乙酯清除 DPPH 自由基的 IC 50 见
–1
Ⅲd：IR (KBr)，v/cm ：3302 (N—H)，1721 表 1。清除 DPPH 自由基能力由强到弱的顺序为：
1
(C==O)，1197 (C—O)。 HNMR (400 Hz，C 3 D 6 O)， Ⅲa >Ⅲd >Ⅲc >Ⅲb > CA > V C 。各物质间均存在显
δ：7.40 (d，J = 15.6 Hz，1H，OH)，7.40 (d，J = 12.9 Hz， 著性差异（P<0.05）。由此可见，咖啡酰氨基酸乙酯
1H，OH)，6.83 (d，J = 8.1 Hz，1H，OH)，6.75 (d， 类物质清除 DPPH 自由基的作用强于咖啡酸单体，
J = 7.6 Hz，1H，NH)，6.64 (s，1H，CH==C)，6.57 且明显高于常用抗氧化剂 V C 。咖啡酸与不同氨基酸
(t，J = 14.4 Hz，1H，C==CH)，5.01(s，1H，ArH)， 反应生成酰胺后清除自由基活性强弱明显不同，表
4.76 (t，J = 6.6 Hz，1H，ArH)，4.70 (s，1H，ArH)， 明侧链氨基酸基团对于咖啡酰胺酯类物质的抗氧化
4.65 (m，J = 28.6 Hz，2H，ArH)，4.45 (dd，J = 8.6 Hz， 性影响显著，氨基酸基团对 DPPH 自由基清除活性影
2H，ArH)，4.10 (t，J = 25.7 Hz，1H，CH)，3.14~2.89 响的强弱顺序为：缬氨酸>酪氨酸>蛋氨酸>亮氨酸。

表 1 不同合成产物对 DPPH 自由基的清除效应
Table 1 Effects of different synthetic products on DPPH free radical scavenging
Ⅲa Ⅲb Ⅲc Ⅲd CA V C
*
*
*
IC 50/（µmol/L） 11.23±0.24 20.86±0.04 19.50±0.04 * 15.62±0.03 27.54±0.06 * 76.21±0.04
*P<0.05（与 V C 组比较）。

2.4 羟基自由基清除活性测定 （P<0.05）。各物质清除羟基自由基能力强弱顺序
氧化应激是引发多种疾病的病理生理机制的基 为：Ⅲc >Ⅲd > CA >Ⅲa >Ⅲb > V C 。可知，咖啡酰
础。当活性氧的产生超过细胞防御系统的能力时， 氨基酸乙酯类衍生物清除羟基自由基能力均强于常
氧化应激就会发生。羟基自由基是一种活性氧，通 用抗氧化剂 V C 。不同咖啡酰氨基酸乙酯类物质清除
常在体内形成，对生物分子如脂质、蛋白质和核酸 羟基自由基能力的不同，与其侧链氨基酸基团有关。
造成严重损害 [15] 。咖啡酰氨基酸酯衍生物清除羟基 羟基自由基的清除能力与 DPPH 自由基的清除能力
自由基的 IC 50 如表 2 所示。除Ⅲc 与Ⅲd 物质之间无 强弱顺序不一致，说明实验体系不同，对于被测物
显著性差异外，其他各物质间清除能力差异显著 质的抗氧化能力反应存在差异性。

表 2 不同合成产物对 OH 自由基的清除效应
Table 2 Effects of different synthetic products on the elimination of OH radicals
Ⅲa Ⅲb Ⅲc Ⅲd CA V C
*
*
*
*
IC 50/（mmol/L） 0.35±0.001 0.39±0.002 0.24±0.002 * 0.25±0.001 0.29±0.001 1.62±0.004
*P<0.05（与 V C 组比较）。

2.5 红细胞溶血率测定 其他各被测物质间均存在显著性（P<0.05）。表 3 中
RBC 是 Draize 眼刺激实验的替代方法之一 [16] 。 各被测样品浓度为 1 mmol/L 时（SDS 质量浓度为
基本原理是通过测定血红蛋白漏出量及蛋白变性程 1.3 g/L），样品溶血率（均值）由大到小排序为：SDS
度来评价化学品对眼组织细胞的损伤，国际上主要 （74%）>Ⅲb（40%）> CA（1.5%）>Ⅲa、Ⅲc、Ⅲ
将 RBC 实验用于化妆品产品及原料等化学品的眼 d、DMSO（<1%）。由溶血率大小推知，咖啡酸与
刺激性研究。 氨基酸乙酯盐酸盐成酰胺后刺激性普遍降低。前人
前期研究发现，样品浓度越大，溶血率越高， 研究发现，亮氨酸可通过抑制腺苷酸环化酶活性实
对红细胞膜的刺激性越强。咖啡酰氨基酸乙酯衍生 现膜电位去极化，使细胞膜长时间处于受刺激状
物红细胞溶血率见表 3。被测物质Ⅲc 对红细胞膜的 态 [17] 。咖啡酰亮氨酸乙酯可能由于亮氨酸基团的存
刺激性与Ⅲa、溶剂（DMSO）之间无显著性差异， 在，从而对红细胞膜表现出高于咖啡酸单体的刺激性。

表 3 不同化合物作用下的红细胞溶血率
Table 3 Effects of different compounds on red blood cell hemolysis rate
Ⅲa Ⅲb Ⅲc Ⅲd CA DMSO SDS
*
*
*
*
溶血率/% 0.42±0.004 40±0.074 0.40±0.175 * 0.62±0.142 1.5±0.195 0.84±0.102 * 74±0.048
*P<0.05（与 SDS 组比较）。