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第 3 期                      王   东，等:  咖啡酰氨基酸乙酯的合成及其抗氧化活性                                  ·495·


                                                   [1]
                 咖啡酸（CA）又名 3,4-二羟基肉桂酸 。咖啡                      （SDS），美国 Amresco Biotechnology Grade。
            酸是一种结构简单的酚酸类化合物，是次生植物代                                 傅里叶变换红外光谱仪（IS10），美国 Nicolet
            谢产物，在很多植物中都存在              [2-3] ，其具有抗氧化、          公司；核磁共振波谱仪，瑞士 Bruker 公司（运行条
                                          [4]
            抗菌、抗病毒等多方面生物活性 。咖啡酸在常见                             件：AV300 MHz，溶剂：CDCl 3 /DMSO-d 6 ）；质谱仪
                                                      [5]
            溶剂体系中配伍性差，固而限制了其应用范围 。                             （Xevo G2 Q-TOF），美国 Waters 公司（质谱条件：
                 咖啡酸酰胺是咖啡酸的重要衍生物，既保有生                          ESI 离子源，m/Z 范围：50~ 500 amu；电喷雾电压：
            物活性，又可以增强咖啡酸单体的亲脂性，从而其                             4500 V）；酶标仪（infinite M200 PRO），瑞士 TECAN
            应用范围更广。由于自然界中咖啡酰胺衍生物提取                             公司；台式 离心机（ 5810R ），德 国 Eppendorf
                                                  [7]
                                          [6]
            纯化条件复杂，故限制了其应用 。Rajan 等利用                          Centrifuge 公司。
            CA 与 3-甲基-2-烯胺在苯并三氮唑-1-基氧基三（二                      1.2    咖啡酰氨基酸乙酯的合成
            甲基氨基）磷         六氟磷酸盐（BOP）耦合剂下生成                        合成路线如下所示。
            咖啡酰-3-甲基-2-烯胺，通过抗氧化实验，证明咖啡
                                              [8]
            酸酰胺是非常有潜力的抗氧化剂。Yoo 等利用乙酰
            化的咖啡酸与苯磺酰胺在缩合试剂 1-(3-二甲氨基丙
            基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）、1-羟基苯并三
            唑（HOBt）的作用下生成乙酰化保护的咖啡酰苯磺
            酰胺，脱乙酰化后生成咖啡酰苯磺酰胺，实验发现，
            合成的化合物对 DPPH 自由基和超氧阴离子自由基
            有抑制作用。氨基酸是维持人类生命活动的重要物                                 采用 L-缬氨酸乙酯盐酸盐、L-亮氨酸乙酯盐酸
            质基础，不仅发挥营养作用，也常具有其他功能，                             盐、L-蛋氨酸乙酯盐酸盐、L-酪氨酸乙酯盐酸盐在
            缬氨酸、酪氨酸具有抗菌             [9-10] 、改善免疫机能等功           EDC 作用下分别与咖啡酸进行反应，生成相应的咖
            能。曲酸作为酪氨酸酶抑制剂，存在一些缺陷，如                             啡酰氨基酸乙酯。实验步骤参考文献[6]，并做部分
            活性不高、性质不稳定等。为此，Noh                  [11] 等设计合      改动，以咖啡酰酪氨酸乙酯的合成为例。具体步骤
            成了一类曲酸-氨基酸结合体，实验发现，与氨基酸                            为：取 L-酪氨酸乙酯盐酸盐（2.03 g，8.25 mmol）、
            结合后的曲酸对酪氨酸酶的抑制率明显强于曲酸单                             咖啡酸（1.5 g，8.25 mmol）、l-羟基苯并三唑（1.15 g，
                   [6]
            体。Wei 等通过 EDC/HOBt 法成功合成咖啡酰甘氨                      8.5  mmol）完全溶解于装有 DMF（25  mL）的圆底
            酸乙酯与咖啡酰苯丙氨酸乙酯。                                     烧瓶中，冰浴下电磁搅拌，并缓慢滴加三乙胺（3.45
                 受此启发，本文以咖啡酸和 4 种氨基酸乙酯盐                        mL，24.75 mmol）。反应 10 min 后，加入 EDC（1.6
            酸盐为原料，通过 HOBt/EDC 法合成了 4 种咖啡酰                      g，8.35  mmol），撤去冰浴，自然升温至室温，搅
            氨基酸乙酯，4 种物质均未见文献报道。运用核磁                            拌 18~24 h。用薄层层析法〔V（乙酸乙酯）∶V（石
                       1
            共振氢谱（ HNMR）、傅里叶变换红外光谱（FTIR）                        油醚）=  1∶1〕检测是否反应完全，反应完全后在
            和高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）表征确定 4 种化                       反应液中倒入 50×2 mL 水，用（4×100 mL）乙酸乙
            合物的结构。通过体外清除 DPPH 自由基、羟基自                          酯萃取并用（50×2  mL）饱和食盐水冲洗，回收有
            由基实验和红细胞溶血实验测定了目标产物的抗氧                             机相，无水硫酸钠干燥（24  h）、过滤、（200~300
            化活性及刺激性。以期为咖啡酰氨基酸乙酯类物质                             目）硅胶色谱柱分离〔洗脱剂为 V（乙酸乙酯）∶V
            作为化妆品原料、食品防腐剂提供参考价值，并为
                                                               （石油醚）= 1∶2〕，减压回收溶剂，真空干燥得到
            咖啡酰氨基酸乙酯类物质的医学研究提供重要理论
                                                               白色粉末状固体咖啡酰酪氨酸乙酯（Ⅲd）2.4 g，产
            依据。
                                                               率 78.4%。
            1    实验部分                                          1.3    清除 DPPH 自由基实验
                                                                   参考文献[12]方法测定 DPPH 自由基清除活性，
            1.1    主要试剂与仪器                                     咖啡酰缬氨酸乙酯（Ⅲa）、咖啡酰亮氨酸乙酯（Ⅲb）、
                 咖啡酸、L-缬氨酸乙酯盐酸盐、L-亮氨酸乙酯                        咖啡酰蛋氨酸乙酯（Ⅲc）、Ⅲd、V C 均用无水乙醇
            盐酸盐、L-酪氨酸乙酯盐酸盐、L-蛋氨酸氨酸乙酯                           溶解，配制一系列浓度，将 1 mL 不同浓度的样品溶
                                                                                    –4
            盐酸盐、1-羟基苯并三唑（HOBt）、1-乙基-3-（二                       液与 1 mL DPPH·（2×10  mol/L）的乙醇溶液混合，
            甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），北                          摇匀，暗处放置 30 min，517 nm 处测定吸光度，以
            京伊诺凯科技有限公司，均为 AR；新鲜兔血，北京                           等量的无水乙醇作为空白对照，V C 作为阳性对照。
            海淀区兴隆实验动物养殖厂；十二烷基硫酸钠                               以样品浓度为自变量，自由基清除率为因变量作
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