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第 3 期 杨洪亮，等: 吡啶联异噁唑啉类杂环衍生物的合成及生物活性 ·491·

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ES-MS, m/Z: 实测值(理论值): 416.4(415.1) [M+H ]。 各组的平均麻痹时间和平均死亡时间 [19-21] 。
1.3 目标化合物的生物活性测试
1.3.1 抗菌活性测试 [16] 2 结果与讨论
将目标化合物及阳性对照药（利奈唑胺）用
2.1 化合物结构解析
DMSO 溶解后加 MH 肉汤培养基稀释，制得质量浓
本文通过 9 步反应合成 12 个目标化合物，其结
度为 512 mg/L 的抗菌药物工作液，备用。从80 ℃
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1
构均经 HNMR、 CNMR、MS 及 IR 确证。此处以
冰箱中取已传代菌液，接种于已灭菌的 MH 肉汤培养
化合物Ⅸa 为例，进行结构解析。
基中，37 ℃培养箱中培养 18~24 h。用灭菌的接种环
氢谱中 δ 8.31 处（d，1H，J = 2.4 Hz）为吡啶
取斜面菌种在平皿上划线，分离单菌落，装于含有
环上 2 位氢；δ 8.10 处（t，1H，J = 5.6 Hz）为酰胺
MH 培养基的烧瓶中，37 ℃培养 10~15 h。借助麦氏
氮上的氢；δ 7.82 处（dd，1H，J = 9.2 和 2.4 Hz）
比浊仪，用 MH 肉汤稀释培养菌液使其浊度达到 0.5 为吡啶环上 4 位的氢；δ 6.90 处（d，1H，J = 9.2 Hz）
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麦氏比浊标准，此时菌液浓度约 l × 10 CFU/L，再 为吡啶环上 5 位的氢；δ 4.90~4.64 处（m, 1H）为异
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将其稀释 100 倍，作为测试菌液，最终浓度为 l × 10 唑啉环上 CH 的氢；δ 3.74~3.64 和 δ 3.57~3.49 处
CFU/L。
（ m， 4H） 为吗啡啉环 上的两组 CH 2 上氢； δ
MIC 采用肉汤稀释法进行测定：在 96 孔板上， 3.44~3.29 和 3.10~3.04 处（m，1H）为异唑啉环
每孔加入 100 μL 肉汤培养基，第一列每孔加入 100 μL 上 CH 2 的氢，由于这两个氢分别处于环上和环下，
抗菌药物工作液，然后进行倍比稀释，稀释至第 10 化学环境有所不同，故出现两个峰；δ 3.25~3.21 处
列，吸出 100 μL 弃去，质量浓度梯度为：256、128、 (m，2H)为与酰胺氮相连的 CH 2 上的氢；δ 1.82 处(s，
64、32、16、8、4、2、1、0.5 mg/L，最后两列分别 3H)为 CH 3 上的氢。
为阴性对照孔（仅含菌液）和空白对照孔（仅含培 碳谱中 δ 170.1 处为羰基碳；δ 159.8~ 107.2 处 6
养基）。 个峰为吡啶环上碳和异唑啉环上双键碳；δ 79.3
按上述方法将各孔中抗菌药物工作液与菌液混 处为异唑啉环上 CH 的碳，δ 66.3 和 45.2 处为吗
合好后，再将 96 孔板置于恒温培养箱中 37 ℃培养 啡啉环上两组 CH 2 上的碳；δ 42.3 处为环外 CH 2 上
（18±2）h，当阴性对照孔的细菌有足够生长（如明显 的碳；δ 37.7 处为异唑啉环上 CH 2 的碳；δ 23.0
的纽扣状生长或绝对的浊度），未接种的空白对照孔没 处为 CH 3 上的碳。
有生长，同时阳性药物的 MIC 必须在规定的质控范围 红外光谱中，3390 cm 处为酰胺 N—H 伸缩振
1
内（2~4 mg/L）时，才可以读取微量稀释板的结果。 动峰；2905、2858 cm 处为烷烃 C—H 伸缩振动峰；
1
每个孔中细菌生长的程度均应和阴性对照孔进行对比， 1649 cm 处为羰基伸缩振动峰；1612 cm 处为吡
1
1
并且将能够明显抑制细菌生长的最小浓度认定为 啶中 C==N 伸缩振动峰；1504 cm 处为 C==C 伸缩
1
MIC。 振动峰；1548 cm 处为酰胺 N—H 弯曲振动峰；
-1
1.3.2 驱肠虫活性测试 1381 cm 1 处为烷烃 C—H 弯曲振动峰；1112 cm 1
由于蚯蚓与机体肠道内蛔虫在解剖学和生理学 处为 C—O 伸缩振动峰。
特性上具有很高的相似度，因此，选取成年印度蚯 质谱测得化合物Ⅸa 分子离子峰为 305.2，与目
蚓(Pheretima posthuma)来评估目标化合物的体外驱 标化合物相对分子质量吻合，综合以上分析说明，
虫效果 [17-18] 。将长度 3~4 cm、宽度 0.1~0.2 cm 的蚯 已成功制备了化合物Ⅸa，其余化合物均按同样方法
蚓用生理盐水清洗蚯蚓上泥土及排泄物，目标化合 鉴定。
物及阳性对照药阿苯达唑用最少量的 DMSO 溶解， 2.2 目标化合物的抗菌活性
再用生理盐水稀释，制得质量浓度为 2 g/L 的待测 将所合成的 12 个目标化合物分别在金黄色葡
液，将待测液置于灭菌平板中(直径 6 cm)，阴性对 萄球菌 ATCC25923、肺炎链球菌 ATCC49619 和粪
照组平板中加入等量生理盐水。 肠球菌 ATCC29212 上采用肉汤稀释法进行最小抑
将蚯蚓放入平板中（每组 6 只，每个平板 2 只）， 菌浓度（MIC）的测试，结果见表 1。
观察蚯蚓的活动情况，并在 1 h 内记录各组蚯蚓的 从表 1 可以看出，12 个目标化合物对 3 种菌株
麻痹时间和死亡时间。当摇动蚯蚓没有观察到明显 均有作用效果，对金黄色葡萄球菌 ATCC25923 的效
运动，只有剧烈摇动才能观察到运动时，记录该时 果普遍略好于肺炎链球菌 ATCC49619 和粪肠球菌
间为麻痹时间。当剧烈摇动或将其浸入 50 ℃水中均 ATCC29212。其中，化合物Ⅸf 和Ⅸl 的抗菌活性最
没有观察到运动时，记录该时间为死亡时间，计算 佳，MIC 分别为 16、32 和 32 mg/L。构效关系可以