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·712·                             精细化工   FINE CHEMICALS                                  第 36 卷

                                                               度有关,OAA 能为大环内酯类抗生素提供内酯环的
                                                               前体。磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)和丙酮酸
                                                               羧化酶(PC)是放线菌中 OAA 生物合成的两种关
                                                               键酶,PC 催化丙酮酸转化为 OAA,PEPC 催化磷酸
                                                               烯醇式丙酮酸转化为 OAA,OAA 是生成丙二酰 CoA
                                                               和甲基丙二酰 CoA 的主要底物。因此,PC 和 PEPC
                                                               酶的活性反映了大环内酯类抗生素内酯环的生物合
                                                               成能力。柠檬酸合成酶(CS)是 TCA 循环中的关
                                                               键酶,可以催化 OAA 转化为柠檬酸,从而使 OAA

              图 4    缬氨酸对 HK(a)、PFK(b)和 PK(c)酶活力的影响            被利用。
            Fig.  4    Effects  of  Val  on  the  enzyme  activities  of  HK(a),   图 6 为添加缬氨酸后对三羧酸循环(TCA)的
                   PFK(b) and PK(c)

            于对照组,在 60 h 时酶活提高了 105.05%,而 72 h
            时实验组低于对照组(图 4c),该酶活的变化导致
            糖酵解速率加快,葡萄糖的利用程度提高,该结果与
            图 3 的实验结果相一致。根据以上研究结果,本文检
            测了 EMP 代谢产物丙酮酸的含量,结果如图 5 所示。


















                    图 5    缬氨酸对丙酮酸质量浓度的影响
                Fig. 5    Effect of Val on the content of pyruvic acid

                 添加缬氨酸后,实验组丙酮酸质量浓度在 48  h
            内显著升高,达 5.09 g/L,而对照组在 60 h 达到最
            大值,为 2.82  g/L,实验组最大值比对照组提高了
            80.50%,但随着发酵时间的延长,对照组和实验组
            的丙酮酸质量浓度无明显差别。胞外葡萄糖进入细
            胞内后,首先经过 EMP 途径生成丙酮酸后才能进一
            步转化为乙酰辅酶 A,然后进入三羧酸循环(TCA),
            在一定程度上丙酮酸质量浓度的变化可以反映菌体
            对糖的利用情况。添加缬氨酸后,胞内的丙酮酸质
            量浓度明显高于对照组(48 h),造成丙酮酸大量积
            累,而后又被利用,说明缬氨酸对 EMP 途径有一定
            的促进作用,葡萄糖利用也会得到加强;丙酮酸在
            丙酮酸羧化酶作用下可以转化为草酰乙酸,进一步转
            化为二碳和三碳类物质,为纳他霉素的合成提供更多
            的前体物质。

            2.5    缬氨酸对三羧酸循环的影响
                 纳他霉素产量的高低与草酰乙酸(OAA)的浓
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