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·712· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 36 卷

度有关，OAA 能为大环内酯类抗生素提供内酯环的
前体。磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）和丙酮酸
羧化酶（PC）是放线菌中 OAA 生物合成的两种关
键酶，PC 催化丙酮酸转化为 OAA，PEPC 催化磷酸
烯醇式丙酮酸转化为 OAA，OAA 是生成丙二酰 CoA
和甲基丙二酰 CoA 的主要底物。因此，PC 和 PEPC
酶的活性反映了大环内酯类抗生素内酯环的生物合
成能力。柠檬酸合成酶（CS）是 TCA 循环中的关
键酶，可以催化 OAA 转化为柠檬酸，从而使 OAA

图 4 缬氨酸对 HK(a)、PFK(b)和 PK(c)酶活力的影响 被利用。
Fig. 4 Effects of Val on the enzyme activities of HK(a), 图 6 为添加缬氨酸后对三羧酸循环（TCA）的
PFK(b) and PK(c)

于对照组，在 60 h 时酶活提高了 105.05%，而 72 h
时实验组低于对照组（图 4c），该酶活的变化导致
糖酵解速率加快，葡萄糖的利用程度提高，该结果与
图 3 的实验结果相一致。根据以上研究结果，本文检
测了 EMP 代谢产物丙酮酸的含量，结果如图 5 所示。

图 5 缬氨酸对丙酮酸质量浓度的影响
Fig. 5 Effect of Val on the content of pyruvic acid

添加缬氨酸后,实验组丙酮酸质量浓度在 48 h
内显著升高，达 5.09 g/L，而对照组在 60 h 达到最
大值，为 2.82 g/L，实验组最大值比对照组提高了
80.50%，但随着发酵时间的延长，对照组和实验组
的丙酮酸质量浓度无明显差别。胞外葡萄糖进入细
胞内后，首先经过 EMP 途径生成丙酮酸后才能进一
步转化为乙酰辅酶 A，然后进入三羧酸循环（TCA），
在一定程度上丙酮酸质量浓度的变化可以反映菌体
对糖的利用情况。添加缬氨酸后，胞内的丙酮酸质
量浓度明显高于对照组（48 h），造成丙酮酸大量积
累，而后又被利用，说明缬氨酸对 EMP 途径有一定
的促进作用，葡萄糖利用也会得到加强；丙酮酸在
丙酮酸羧化酶作用下可以转化为草酰乙酸，进一步转
化为二碳和三碳类物质，为纳他霉素的合成提供更多
的前体物质。

2.5 缬氨酸对三羧酸循环的影响
纳他霉素产量的高低与草酰乙酸（OAA）的浓