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·716·                             精细化工   FINE CHEMICALS                                  第 36 卷

                 百合科（Liliaceae）植物黄精（Polygonatum）               1.3    多糖定性分析方法
            是中国著名的药食两用植物，其主要活性成分为多                             1.3.1    Moilsh 实验
            糖和甾体皂苷，具有提高免疫、预防肿瘤、降低血                                 参考 Yang  [11] 等的方法，以质量分数为 1.0%葡
            糖和血脂等药理作用          [1-3] 。《中国药典》收载了滇黄              萄糖溶液作为阳性对照，以蒸馏水作为阴性对照，
                                                       [1]
            精（P. kingjanttm）、黄精（P. sibmcmn）等品种 。               进行滇黄精多糖的 Moilsh 实验。
                                                       [2]
            近年来，国内外有关黄精多糖的研究报道较多 ，                             1.3.2    Fehling 实验
            而对滇黄精多糖的研究相对较少               [2-3] ，鲜见滇黄精多             参考 Gangwar  [12] 等的方法，配制 Fehling 试剂，
            糖结构解析与糖尿病防治机制的报道。糖尿病是严                             以质量分数为 5.0%葡萄糖溶液作为阳性对照，以蒸
            重威胁人体健康的慢性代谢疾病之一。据世界卫生                             馏水作为阴性对照，进行滇黄精多糖的 Fehling 实验。
            组织报道，从 1980 年到 2014 年，全球 18 岁以上成                   1.3.3    碘-碘化钾实验
            人的糖尿病患病率从 4.7%增加到了 8.5%。到 2030                         参考 Šimková  [13] 等的方法，分别以质量分数为
            年，糖尿病可能成为影响人类寿命的第七大类疾病                             1.0%可溶性淀粉溶液和蒸馏水作为阳性和阴性对
            [4]                                                照，进行滇黄精多糖的碘-碘化钾实验。
              。中国目前约有 1.096 亿糖尿病患者，是世界上罹
                                 [5]
            患人数最多的国家之一 。α-葡萄糖苷酶和 α-淀粉                          1.4   多糖定量分析与得率计算方法
                                   [6]
            酶是糖分解代谢的关键酶 。从植物中筛选 α-葡萄                               采用 Zhang   [14] 等的方法测定滇黄精多糖的含
                                                                                                           2
            糖苷酶、α-淀粉酶抑制剂，在糖尿病防治中具有一                            量。标准曲线方程为 y=4.92995x－0.01063（R =
            定的潜在应用价值          [7] 。冯静  [7] 等比较研究了雪菊            0.9908），其中，x 为葡萄糖对照品溶液质量浓度
            （ Coreopsis tinctoria）、 金丝菊（ Chrysanthemum         （g/L），y 为吸光度。多糖提取得率/%=滇黄精提取
            morifolium  cv.  ‘Jinsiju’）、香菊（C. morifolium  cv.   物中多糖质量（g）/滇黄精样品粉末质量（g）×100。
            ‘Xiangju’）水提物的 α-葡萄糖苷酶抑制能力，发现                      1.5    光谱分析与结构表征方法
            香菊的抑制活性高于雪菊与金丝菊。                                   1.5.1    紫外光谱法（UV）
                 本研究采用水提醇沉等方法分离制备了滇黄精                              将少许滇黄精多糖溶于蒸馏水，注入石英杯（液
            多糖，分析了多糖样品对 α-葡萄糖苷酶和 α-淀粉酶                         面在石英杯高度的 2/3~3/4）中，使用 TU-1810 型紫外-
            活 力的抑 制效 应，运 用傅 里叶变 换红 外光 谱                        可见分光光度计进行 190~300 nm 区间光谱扫描              [15] 。
            （FTIR）、圆二色谱（CD）等技术分析了多糖样品                          1.5.2    傅里叶变换红外光谱法
                                                                   将滇黄精多糖与溴化钾按照质量比 1∶100 混
            的化学结构，运用扫描电子显微镜（SME）观察了
                                                               匀，压片（压力不超过 10 Pa），置于 Tensor 27 型傅
            多糖的微观形貌，运用热重分析（TGA）方法探讨
                                                               里叶变换红外光谱仪（德国 Bruker 公司）中扫描，
            了多糖的热稳定性，以期为滇黄精资源开发和糖尿
                                                                                                       –1
                                                               先扫描背景，再扫描样品，记录 4000~500 cm 内的
            病防治提供参考。
                                                               红外光谱    [16] ，之后用软件处理图。
            1    实验部分                                          1.5.3    圆二色谱法
                                                                   将少许滇黄精多糖溶于蒸馏水中，用 Chirascan
            1.1    植物材料与试剂                                     型圆二色光谱仪（英国 Applied Photophysics 公司）
                 滇黄精由云南省澜沧澎勃生物药业公司所提                           扫描，时间常数为 1 s，带宽为 1，在 50 nm/min 速
            供。将新采挖的滇黄精洗净、切片，晾干后研磨成                             率下采集 190~300 nm 的圆二色谱数据           [17] 。
            80 目粉末（备用）。α-葡萄糖苷酶（来源于酵母，                          1.6    扫描电子显微镜法
            50 U/mg）、α-淀粉酶（来源于地衣芽孢杆菌，4000 U/g）                     使用 S-3400N 型扫描电子显微镜（日本 Hitachi
            和对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（质量分数≥                            公司）观察滇黄精多糖的微观形貌                [18] 。
            99%），上海源叶生物公司；阿卡波糖（50 mg/片），                       1.7    热重分析方法
            北京拜耳医药公司。                                              采用 Q1000DSC+LNCS+FACS  Q600SDT 型
            1.2    多糖分离纯化                                      热分析系统（美国 TA 公司）对滇黄精多糖进行
                 参考侯双菊      [8] 的方法提取滇黄精多糖。称取                  热重分析    [19] 。取约 10 mg 样品，置样品容器中，在
            10 g 滇黄精样品粉末，加入 200 mL 蒸馏水，在 90 ℃                  10 ℃/min 的 N 2 气氛下测定其在 0~700 ℃区间的质
            冷凝回流 2.5 h，收集提取液（共提取 2 次）。减压                       量变化。
            蒸馏后，用 4 倍体积的 95%乙醇（体积分数）醇沉                         1.8    酶学实验方法
            10~14 h，离心后收集沉淀（共醇沉 2 次）。参照文                       1.8.1    α-葡萄糖苷酶实验
            献 [9-10] 报道的方法纯化多糖，用 FDU-1200 型冷冻干                     参考 Hemalatha  [20] 等的方法，根据 α-葡萄糖苷
            燥机（上海爱郎仪器公司）制得多糖固体样品。                              酶水解对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷产生对硝基
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