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第 7 期 张宇靖，等: 高纯竹叶碳苷黄酮纳米材料的护肤功效 ·1403·

0.25%的胰蛋白酶消化，收集并调整细胞密度为 选取 20 名符合条件的受试者（年龄在 22~42
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5×10 个/mL，每孔 100 μL 接种于 96 孔板，并补充 岁）参加测试，测试温度为（22±2）℃，相对湿度
培养液至 200 μL，于 37 ℃、体积分数 5% CO 2 环境 为（50±5）%。测试前，在受试者曲臂内侧标记 3
中培养过夜，贴壁后每孔加入 200 μL 不同浓度的受 个受试区域（每个区域为 4 cm×4 cm），统一用清水
试物溶液，每个浓度设置 6 个复孔，空白对照组加 清洗受试区域，并将受试者随机分为数量相等的两
2
入新鲜培养液，继续培养 48 h。 组，实验组按 2 mg/cm 涂抹添加 H -BLFnp 的乳液，
1.2.1.2 细胞增殖率的测定 对照组涂抹等量的空白基质。受试者使用样品 1、2、
受试物处理 48 h 后，每孔加入 5 mg/mL 的 MTT 4 h 后，分别采用皮肤水分含量测试仪和水分散失量
溶液 20 μL，培养箱中孵育 4 h，弃上清液，每孔加 测试仪对受试者 3 个受试区域皮肤的水分含量
入 150 μL 的 DMSO，震荡 10 min，混匀后用酶标仪 （MMV）、经皮水分散失量（TEWL）进行测定 [21] ，
测定各孔在 570 nm 下的吸光值 OD。细胞增殖率按 并取平均值。
以下公式计算 [17] ：
OD  OD 表 1 人体实验的测试样品配方
细胞增殖率 /%  实验孔 空白孔  100
OD 空白对照孔  OD 空白孔 Table 1 Formulation of emulsion in human trial
1.2.1.3 细胞内酪氨酸酶活性相对抑制率的测定 [18] 相别 组分 质量分数/%
肉豆蔻酸异丙酯 3.00
受试物处理 48 h 后，吸弃上清液，每孔加入质
聚二甲基硅氧烷 3.00
量分数为 1%的 TritonX-100 水溶液 50 μL，迅速放
液体石蜡 1.00
入80 ℃冰箱内冻存 30 min，取出后 37 ℃融化 A
甘油硬脂酸酯 1.00
20 min 使细胞完全破裂，每孔加入质量分数为 1%
鲸蜡硬脂醇 1.50
的 L-DOPA 溶液 10 μL，置于 37 ℃恒温水浴中反应
蔗糖硬脂酸酯 2.00
30 min，用酶标仪测定 475 nm 处的吸光值 OD。酪 甘油 4.00
氨酸酶活性相对抑制率按以下公式计算： 丁二醇 3.00
 OD  B 黄原胶 0.10
酪氨酸酶活性相对抑制率 / %   1  实验孔    100
 OD 空白对照孔  EDTA 二钠 0.03
①
1.2.1.4 细胞内黑色素含量的测定 [19] 纯净水 to 100
C 甲基异噻唑啉酮 0.10
受试物处理 48 h 后，吸弃上清液，用 PBS 缓冲
D H-BLFnp 5.00
液将沉淀细胞吹打成悬液后，吸取 1 mL 细胞悬液于
①表示添加纯净水至 100%（质量分数）。
离心管中，1500 r/min 离心 10 min 后弃去上清液，

先加入 200 μL PBS 缓冲液使细胞重新悬浮，再加入
1.2.2.3 H -BLFnp 延缓衰老功效评价
1 mL 乙醇-乙醚溶液（体积比为 1∶1），室温下静置
选取 30 名符合条件的受试者（年龄在 22~42
20 min，3000 r/min 离心 5 min，弃去上清液，加入
岁）参加测试，测试温度为（22±2）℃，相对湿度
1 mL 含 10%质量分数 DMSO 的 1 mol/L NaOH 溶液，
为（50±5）%。测试前，在受试者的两侧脸颊和两
于 80 ℃水浴 45 min，用酶标仪在 405 nm 波长下测
边眼角外侧各标记 1 个受试区域（即总共标记 4 个
定吸光值 OD。细胞内黑色素含量按以下公式计算：
受试区域，每个区域为 4 cm×4 cm），统一用清水清
OD
细胞内相对黑素含量 /%  实验孔  100 洗受试区域。在受试者一侧面部使用实验组样品，
OD 空白对照孔 另一侧面部使用对照组样品，每天早晚各涂抹样品
1.2.2 H -BLFnp 护肤功效的人体实验 一次，每次涂抹量为 2 mg/cm ，连续涂抹 30 d，在
2
1.2.2.1 测试样品的制备 15、30 d 时进行回访，测定受试者 4 个受试区域的
实验样品为添加 5.0%质量分数 H -BLFnp 的乳液 皮肤的水分含量 MMV，并用皮肤弹性测试仪测定
（具体配方见表 1），对照样品为空白基质（配方参 皮肤弹性 R2、Q2 值，取平均值。
照表 1，不添加 D 相，其他相不变）。 1.2.2.4 H -BLFnp 美白功效评价
配制步骤 [20] 为：将 A 相、B 相各组分分别混合 受试者筛选、分组及实验方法同 1.2.2.3，在 15、
均匀，加热至 80 ℃后将 A 相缓慢倒入 B 相中，均 30 d 时进行回访，对受试者各受试区域的皮肤黑色
质（2000 r/min，5 min）后，搅拌降温至 40 ℃，依 素含量（MI）、皮肤明亮度（ITA°、光泽度进行测
次加入 C 和 D 相，搅拌均匀。 定 [22] ，取平均值，并采用面部图像分析系统 VISIA-
1.2.2.2 H -BLFnp 保湿功效评价 CR 进行图像采集。