Page 92 - 精细化工2019年第8期

·1580· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 36 卷

到已长成单层 CEK 细胞的 96 孔中，每孔 200 μL， 由图 1 可知，提取物中金丝桃素与标准品显示
各浓度设 3 个复孔，同时设空白正常细胞对照组和 相同保留时间，并且金丝桃素与提取物中其他杂质
病毒对照组。 成分能够达到基线分离无干扰，可以用于提取物中
1.2.4.2 提取物对病毒感染细胞的阻断作用 金丝桃素的含量测定。
将不同浓度的提取物接种到已长成单层 CEK 2.2 单因素实验结果
细胞的 96 孔中，每孔 100 μL，各浓度设 3 个复孔， 2.2.1 丙酮体积分数对金丝桃素提取量的影响
37 ℃体积分数 5%CO 2 培养箱中作用 2 h，加入 结合文献[17-18]以及预实验结果，以乙醇和丙
100TCID 50 （1×10 9.83 /L）IBV-M41 病毒稀释液， 酮的混合溶剂为提取溶剂时提取效果较好，本文以
每孔 100 μL，同时设空白正常细胞对照组和病毒对 乙醇和丙酮混合溶剂为提取溶剂，固定超声时间为
照组。 30 min，超声功率为 150 W，液料比为 15，超声温
1.2.4.3 药物对已进入细胞病毒的抑制作用 度为 40 ℃，提取次数为 2 次，考察不同丙酮体积
将 100TCID 50 （1×10 9.83 /L）IBV-M41 病毒稀释 分数 10%、30%、50%、70%和 90%对金丝桃素提取
液加入已长成单层细胞的 96 孔中，每孔 100 μL， 量的影响，结果见图 2。
37 ℃体积分数 5%CO 2 培养箱中作用 2 h，再加入不
同浓度提取物，每孔 100 μL，各浓度设 3 个复孔，
同时设空白正常细胞对照组和病毒对照组。
以上 3 种作用方式操作完成后，均于 37 ℃ 体
积分数 5%CO 2 培养箱中孵育，每日观察细胞形态变
化，48 h 后显微镜下观察乌腺金丝桃提取物抑制
IBV 在 CEK 上产生 CPE 结果。

2 结果与讨论

2.1 标准品与提取物的 HPLC 色谱图

金丝桃素与提取物的色谱图见图 1。 图 2 不同丙酮体积分数对提取量的影响
Fig. 2 Effect of different acetone volume fraction on the
extraction amount

由图 2 可知，随着丙酮体积分数增加，提取量
逐渐增大，当丙酮体积分数为 70%时，提取量最大，
为 4.15 mg/g。这可能是由于丙酮渗透能力较强，故
丙酮体积分数的增加能够使目标成分易于从细胞膜
渗透出来；继续升高丙酮体积分数，提取剂极性减
小，而金丝桃素极性较大，根据相似相容原理，其
溶解度也会减小，从而降低金丝桃素得率。因此，
选择体积分数为 70%丙酮-乙醇溶液为提取溶剂进
行后续优化。
2.2.2 超声提取时间对金丝桃素提取量的影响
固定溶剂为丙酮-乙醇溶液，丙酮体积分数为
70%，超声功率为 150 W，液料比为 15，超声温度
为 40 ℃，提取次数为 2 次，考察不同超声时间 20、
30、40、50 和 60 min 对金丝桃素提取量的影响，结
果见图 3。
由图 3 可知，随着提取时间延长，提取量增加，
但在 40 min 后，提取量增加不显著，这可能是由于

图 1 金丝桃素标准品（a）与乌腺金丝提取物（b）的 提取时间过长，金丝桃素有部分分解，另外一些糖
HPLC 色谱图 类和蛋白质杂质慢慢溶出，使得溶液黏度增大，金
Fig. 1 HPLC chromatogram of standard and extract 丝桃素被吸附在固体基质上而不易被提取出来。因