Page 95 - 精细化工2019年第8期

第 8 期 陈惠杰，等: 乌腺金丝桃中金丝桃素超声提取工艺及其抗病毒性能 ·1583·

由表 2 可知，模型拟合度达到了极显著水平 增加而增大，随液料比（X 4 ）增加先增大后减小。
（P<0.001），而误差项差异不显著，说明回归方程 这与单因素实验分析时的结果相吻合。金丝桃素提
与实际情况比较吻合，该回归方程可以代替实验真 取量的变化速率显示超声提取时间（X 3 ）＞丙酮体
实点对实验结果进行分析。方差分析还表明，一次 积分数（X 2 ）＞超声提取温度（X 1 ）＞液料比（X 4 ），
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项（X 1、X 2 ）、二次项（X 1 X 4 、X 2 X 3 和 X 4 ）都有较显 与方差分析统计结果相符。通过 BBD 优化设计分
著影响，回归模型中有极显著作用的项有 X 1 、X 3 、 析，并对最佳的提取工艺条件进行修正：确定最佳
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X 1 X 2 、X 1 、X 2 和 X 3 ，各因素的主效应顺序为：X 3 提取工艺为超声提取温度 41 ℃，丙酮体积分数为
＞X 2 ＞X 1 ＞X 4 。 69.5%，超声提取时间 43.5 min，液料比为 15.3，在
2.3.3 响应曲面分析 最佳提取条件下，进行验证实验，结果表明，金丝
由响应面回归分析和回归方程拟合可以绘出响 桃素提取量为 4.70 mg/g，与预测金丝桃素理论提取
应面图形如图 8 所示。 量 4.71 mg/g 相符，且高于文献报道中乙醇回流法的
由图 8 可知，在实验范围内，金丝桃素提取量 提取量（3.5 mg/g） [19] 。因此，该方法得到的提取
随超声提取温度（X 1 ）先增大后减小，随着丙酮浓 条件参数较为可靠。
度（X 2 ）增加先增大后下降，随超声提取时间（X 3 ）

图 8 响应面（3D）显示不同提取参数的影响
Fig. 8 Response surface (3D) showing the effect of different extraction parameters

2.4 乌腺金丝桃提取物体外抗 IBV 作用 2.4.2 CPE 法检测金丝桃素抗 IBV 病毒作用
2.4.1 乌腺金丝桃提取物的细胞毒性测定 质量浓度为 0.1563 g/L 的乌腺金丝桃提取物对
乌腺金丝桃提取物的细胞毒性的测定结果见 抗 IBV 病毒的 3 种作用结果见图 10。
图 9。 由图 10a、b 可以看出，显微镜下观察到细胞无
由图 9a 可知，高于 90%细胞存活率的乌腺金丝 明显的死亡脱落、变圆缩小等现象，说明质量浓度
桃提取物质量浓度为 0.3125 g/L；由图 9b、c 和 d 为 0.1563 g/L 的乌腺金丝桃提取物对已进入细胞病
可知，质量浓度为 0.3125 g/L 作用的细胞形态与正 毒具有抑制作用，同时对病毒感染细胞具有阻断作
常细胞形态无明显区别。因此，本实验确定乌腺金 用，而由图 10c 可知，细胞具有一定量的死亡脱落
丝桃提取物最大无毒质量浓度为 0.3125 g/L。 现象，说明质量浓度为 0.1563 g/L 的乌腺金丝桃提