Page 141 - 《精细化工》2020年第6期

第 6 期 杜星芳，等: 菜芙蓉多糖的表征与生物活性 ·1207·

Biotium 公司专利产品）的 10 g/L 琼脂糖凝胶电泳 薄层层析鉴定黄蜀葵根茎多糖是由半乳糖、阿拉伯
[9]
点样孔中，工作电压 95 V，在 1×TAE 电泳缓冲液 糖、鼠李糖构成。PAN 等 研究结果显示，黄蜀葵根
（T:Tri; A:NaAc; E:EDTA，40 mmol/L Tris-20 mmol/L 茎多糖是由甘露糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、葡萄糖、
[3]
NaAc-1 mmol/L EDTA）中电泳 40 min 后，凝胶成 半乳糖、阿拉伯糖组成。ZHENG 等 研究发现，采
像仪成像，观察。 自安徽省的菜芙蓉花多糖中单糖组分为葡萄糖、甘
1.2.6 AMP 对 HepG2 细胞增殖的抑制作用 露糖、半乳糖、岩藻糖。由此可见，菜芙蓉植株不同
4
取对数生长期 HepG2 细胞，以 5×10 个/mL 的 部位及不同产地 AMP 中的单糖组成不同，可能产生
浓度接种到 96 孔板，每孔 100 μL，37 ℃、5% CO 2 、 不同的生物学活性。
DMEM 培养基（含有体积分数为 10%的胎牛血清，
体积分数为 1%青霉素-链霉素混合液）中培养，24 h
后，吸去培养基，PBS 清洗 2 遍，分别加入含有不
同质量浓度多糖的细胞培养基，继续培养 24 h 后吸
去培养基，每孔加入 80 μL DMEM 培养基及 20 μL 5 g/L
3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）
混匀，继续培养 4 h。弃去上清，每孔加入 150 μL
DMSO 溶液，避光振荡 20 min，使蓝色甲瓒结晶充
分溶解混匀，酶标仪于 570 nm 处测定吸光值（A）。
以无多糖培养基细胞作为空白对照，5-氟尿嘧啶

（5-FU）处理为阳性对照，细胞增殖抑制率按式（8） 图 1 菜芙蓉多糖单糖组成液相色谱图
计算： Fig. 1 Liquid chromatogram of monosaccharide composition of
 A  AMP
细胞增殖抑制率 / %  1  1   100 （8）
 A 0  2.2 AMP 紫外-可见光谱与红外光谱分析
式中：A 1 为含多糖培养基细胞吸光度；A 0 为无多糖 AMP 紫外-可见光谱图见图 2。由图 2 可知，
培养基细胞吸光度。 AMP 在 260 ~280 nm 范围内无明显吸收峰，考马斯
1.2.7 统计分析 亮蓝法进一步检测也未有蛋白存在（结果未显示），
数据统计采用 SPSS17.0 进行 ANOVA 单因素方 说明 AMP 不含核酸和蛋白，在本研究体系中可排除
差分析及 Duncan 多重检验，P < 0.05 为显著性差异。 核酸与蛋白的影响。

2 结果与讨论

2.1 菜芙蓉多糖总糖含量测定及 AMP 单糖组成分析
将制备的菜芙蓉粗多糖加蒸馏水复溶，配成质
量浓度为 0.2 g/L 溶液，精密量取 1.0 mL，置于具塞
试管中，按照 1.2.1 中苯酚-硫酸法测其吸光值，代
入 葡萄糖 标准 曲线中 ，计 算得到 总糖 含量 为
97.43%，多糖得率为 13.47%。这与张晓娇等 [18] 报道
的金花葵花中多糖含量为 134.60 mg/g 的结果相当，
是金花葵茎叶多糖得率 5.51% [19] 的 2.44 倍，表明
菜芙蓉花醇提后残留物提取多糖具有一定的实际 图 2 菜芙蓉多糖紫外-可见光谱图
Fig. 2 UV-Visible profile of AMP
意义。
多糖组分的差异及物质的量比会影响其生物活 傅里叶变换红外光谱可用于检测醛糖和酮糖的
性。菜芙蓉多糖单糖组成液相色谱图见图 1，11.7 min 糖环构象、糖苷键的构型等。AMP 红外光谱分析如
–1
处为 PMP 溶剂峰，AMP 的单糖种类及物质的量比 图 3 所示，3413.44 cm 处为多糖中 O—H 伸缩振动
–1
分别为 n(鼠李糖 Rha)∶n(葡萄糖 Glu)∶n(阿拉伯糖 峰，2921.67 cm 处为多糖 C—H 伸缩振动吸收峰，
–1
Ara)∶n(岩藻糖 Fuc)=1.44∶5.44∶1.00∶5.37，推测 此为糖类的特征峰。1637.29 cm 处相对较强的吸收峰
–1
19.8 min 处的峰可能为糖醛酸（箭头所指），与红外 为—CHO—的 C==O 伸缩振动。1425.16 cm 处为
–1
光谱中含 C==O 伸缩振动峰相对应。高素莲等 [20] 通过 C—H 的伸缩振动峰；1200~1000 cm 区域较大的 2