Page 139 - 《精细化工》2020年第6期

第 6 期 杜星芳，等: 菜芙蓉多糖的表征与生物活性 ·1205·

种类丰富，包括金丝桃苷、杨梅素和槲皮素等 34 种 AR，日本和光纯化工业株式会社；2, 2'-联氮-二(3-乙
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化合物 。研究证明，其具有良好的解热抗炎、镇 基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐（ABTS），AR，南京奥
痛、降血脂、抑制肿瘤细胞、免疫调节、抗氧化、 多福尼生物科技有限公司；抗坏血酸(V C )，AR，美
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抗凝血等作用 。近年来，在太行山东部山麓地区、 国 Solarbio 公司；5-氟尿嘧啶（5-FU，质量分数≥
晋中、晋南地区、东北地区有很多菜芙蓉人工种植 99.0%），细胞培养级，美国 Solarbio 公司；DMEM
2
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基地 ，每年栽培面积接近 2000 万 m ，主要以花的 基本培养基，美国 Gibco 公司；胎牛血清，浙江天
醇提物黄酮类化合物为原料开发中药及中成药。在 杭生物科技股份有限公司。
黄酮类化合物的提取过程中产生大量残余物，其中 BSA-124S 分析天平，德国 Sartorius 公司；
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多糖则是含量最为丰富的活性物质 。而残余物通常 UV-2000 紫外可见分光光度计，尤尼柯（上海）公
被遗弃造成生物资源浪费和环境污染。 司；RE-52 旋转蒸发器，亚荣生化仪器厂；Avanti J-26
多糖结构复杂多样，具有抗肿瘤、抗氧化、抗 贝克曼冷冻离心机，美国贝克曼公司；Sigma 3-18K
病毒、增强免疫、降血脂、降血糖等活性，对物理、 高速冷冻离心机，德国 Sigma 公司；Agilent 1206
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化学及生物来源的多种活性氧具有清除作用 。此 高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；SpectraMax i3x
外，因多糖作用温和、没有毒副作用，近年来已成 多功能酶标仪，美国美谷分子仪器公司；Nicolet 6700
为医药学领域与食品保健行业共同关注的焦点。程 傅里叶变换红外光谱仪、Forma Series Ⅱ 3130
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丽敏 利用 GC 分析金花葵茎总可溶性糖单糖组成， Water Jacketed 二氧化碳细胞培养箱，美国 Thermo
得到其主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、 Scientific 公司；UV-2500 紫外可见分光光度计，日
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葡萄糖、半乳糖构成。刘剑 通过 DEAE-52 纤维素 本岛津公司；Dolplin-Doc 凝胶成像分析系统，美国
层析柱对所得金花葵籽硒多糖分离，得到 OGP-1、 Wealtec 公司。
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OGP-2、OGP-3 这 3 种多糖组分。PAN 等 从菜芙 1.2 实验方法
蓉的茎叶提取多糖（SLAMP），并且发现能够促进 1.2.1 菜芙蓉多糖（AMP）的制备
RAW264.7 细胞增殖，激活 RAW264.7 释放 NO、 菜芙蓉花粉末经体积分数为 80%乙醇提取黄酮 [11]
TNF-α 和 IL-6，具有显著的免疫调节活性。曹东怡 后的残留物，经抽滤、干燥得到多糖提取原料。称
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等 对金花葵不同部位有效成分进行分析，发现金 取 400 g 多糖原料加入 4 L 去离子水于 80 ℃加热浸
花葵花中的水溶性黄酮、总多糖、总皂苷、甘露醇 提 4 h，抽滤收集滤液，重复 3 次，合并得到液体。
含量均普遍高于其他部位，特别是水溶性黄酮和总 在旋转蒸发器中 60~70 ℃减压浓缩至原来体积的
多糖含量丰富。目前，对菜芙蓉花多糖的研究大都 1/3（呈糖浆状），加入 3 倍体积的体积分数 95%乙
集中在粗多糖的提取方法、工艺优化及部分的抗氧 醇沉淀，4 ℃静置过夜，抽滤收集沉淀。然后，依
化性研究。巫玲丽等 [10] 利用超声辅助提取金花葵总 次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，收集沉淀物。将
多糖并证明其对 DPPH•和•OH 的清除率呈剂量依 5 g 沉淀物溶于 100 mL 水后加入三氯乙酸至最终质
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赖性。ZHENG 等 从菜芙蓉花中分离得到的多糖组 量浓度为 150 g/L，4 ℃静置过夜除去蛋白，4000 r/min
分 AMPS-a 能够有效抑制 SMMC7721 肿瘤细胞的增 离心 10 min，收集上清液，加入体积分数 20%双氧
殖。从菜芙蓉花黄酮提取残留物中提取、分离纯化 水和质量分数 1%的活性炭去除色素，透析。透析液
多糖类物质，探索其生物学活性，有望推动产业化 于 50 ℃恒温箱中干燥，得到白色菜芙蓉粗多糖晶
过程中菜芙蓉资源价值的充分释放。 体。取一定量粗多糖样品加蒸馏水复溶，利用苯酚-
本研究拟以菜芙蓉花提取黄酮（醇提法）后的 硫酸法 [12] 测定多糖总糖含量（质量分数）和多糖得
残余物为原料提取纯化多糖，系统分析其组成，考 率，计算式如下：
察其体外抗氧化能力及抑制 DNA 氧化损伤的作用，   V
菜芙蓉多糖总糖含量 /%  0  100 （1）
研究其抗肿瘤细胞 HepG2 的生物活性，为进一步开 M
0
发菜芙蓉多糖功能因子提供理论依据，以填补菜芙 式中：ρ 0 为样品总多糖的质量浓度，g/L；V 为样品
蓉花多糖研究方面的空白。 溶液的体积，L；M 0 为样品的质量，g。
M  C
1 实验部分 菜芙蓉多糖得率 / %  1 1  100 （2）
M 2
1.1 试剂与仪器 式中：M 1 为提取到的多糖质量，g；C 1 为总糖含量，
菜芙蓉花，7~8 月开花期采集于河北井陉县； %；M 2 为原料质量，g。
pBR322 质粒由吴琛博士惠赠；HepG2 细胞由华北 将 1 g 粗多糖溶解于 50 mL 蒸馏水中，经
制药集团提供；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）， DEAE-52 层析柱（2.5 cm×40 cm），依次用去离子水、