Page 174 - 《精细化工》2021年第4期

·808· 精细化工 FINE CHEMICALS
8313—2018《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测
方法》测定没食子酸和儿茶素类含量。
1.4 SLWE 抗氧化活性测定
1.4.1 还原力测定
[5]
采用铁离子还原/抗氧化能力（FRAP）法 ，以
0.1 mmol/L Trolox（水溶性维生素 E）为阳性对照，
以去离子水稀释，测定 SLWE（体积分数分别为
0.01%、0.1%、1.0%、2.5%、5.0%、10.0%）水溶液
的 FRAP 值。
1.4.2 自由基清除能力测定
以去离子水稀释，以 V C （质量分数 0.1%）水
[6]
溶液为阳性对照，参照 XIE 等 方法测定 SLWE（体
积分数分别为 0.1%、0.25%、1.0%、2.5%、10.0%、
100.0%）水溶液的 DPPH•清除能力；参照 RE 等
方法测定 SLWE（体积分数分别为 0.10%、0.25%、
1.0%、2.5%、10.0%、100.0%）水溶液的 ABTS•清
[5]
除能力；采用邻苯三酚自氧化法 ，测定 SLWE（体
积分数分别为 0.1%、0.25%、1.0%、2.5%、10.0%）
–
[8]
水溶液的 O 2 •清除能力。采用 YOU 等 方法测定
SLWE（体积分数分别为 0.1%、1.0%、2.5%、10.0%、
100.0%）水溶液的•OH 清除能力；以 EDTA-2Na（质
量分数 0.01%）水溶液为阳性对照，参考 GÜLÇIN
方法测定 SLWE（体积分数分别为 0.10%、0.20%、
1.0%、10.0%、100%）水溶液的金属离子螯合能力。
1.5 SLWE 抑制非酶糖基化（NEG）能力
参考庄秀园 [10] 的方法，以质量浓度为 0.1 g/L 的
盐酸氨基胍水溶液为阳性对照，pH 7.4 PBS 为空白
对照，样品自身荧光强度为样品本底对照，以激发
波长 370 nm 和发射波长 440 nm 检测荧光强度，测
定 SLWE（体积分数分别为 0.1%、0.2%、1.0%、10.0%、
100.0%）水溶液对 NEG 的抑制率，按式（1）计算。
NEG 抑制率/% =〔1–(A 样品–A 样品本底)/A 空白〕×100（1）
1.6 SLWE 对正常生长 HFF-1 的影响
1.6.1 HFF-1 细胞培养
选择生长状态良好、对数生长期的 HFF-1 置于
DMEM 高糖培养基〔含 10%胎牛血清（体积分数）、
青链霉素混合液（100 U/mL 青霉素钠、100 mg/L 链
霉素）〕，于 37 ℃、5% CO 2 （体积分数）、饱和湿度
进行培养，每 3 d 更换 1 次培养基。生长约 80%融
合时，用 V〔0.25%（质量分数）胰酶〕∶V(EDTA)=1∶
2 培养基，进行 HFF-1 传代。
1.6.2 SLWE 对 HFF-1 细胞活率的测定
参考刘珊等 [11] 方法，以添加细胞培养基为空白
对照，只铺细胞不加样品为阴性对照，采用 CCK-8
检测 SLWE（体积分数分别为 0.2%、0.4%、0.8%、
1.6%、3.1%、6.25%、12.5%、25%、50%、100%）
水溶液对 HFF-1 细胞活率的影响。
第 38 卷
1.6.3 SLWE 对 HFF-1 中 HA、COL I 和 HYP 含量
的测定
4
HFF-1 接种密度为 3×10 个/孔，培养 6 h 完全
贴壁后，以 V C （质量分数 0.01%）水溶液为阳性对
照，只铺细胞不加样品为阴性对照，参照 HA、COLⅠ
和 HYP 含量测定试剂盒说明书，对 SLWE（体积分
数分别为 1.5%、3%、6%）水溶液处理 HFF-1 中 HA
和 HYP 含量，SLWE（体积分数分别为 0.1%、1.5%、
3%、6%）水溶液处理 HFF-1 中 COLⅠ含量进行测定。
1.6.4 SLWE 对 HFF-1 中 MMP-1、MMP-9 含量的测定
4
HFF-1 接种密度为 3×10 个/孔，培养 6 h 完全
贴壁后，以 V C （质量分数 0.01%）为阳性对照，只铺
细胞不加样品为阴性对照，按 MMP-1 和 MMP-9 试剂
[7] 盒说明书，测定 SLWE（体积分数分别为 0.1%、1.5%、
3%、6%）水溶液处理 HFF-1 中 MMP-1、MMP-9 含量。
1.7 SLWE 对 UVB 致 HFF-1 损伤保护
1.7.1 建立 UVB 致 HFF-1 损伤模型的 SLWE 保护组
选择生长状态良好、对数生长期的 HFF-1，接
4
种密度为 3×10 个/孔，建立实验分组。空白组：不
照射 UVB，不加测试样品，细胞正常培养 60 h；UVB
2
损伤组（辐照剂量 68 mW/cm ）：细胞正常培养 48 h
2
[9] 后，在功率密度 68 µW/cm ，照射距离 10 cm 条件
下，UVB 辐照 100 s 后，培养 24 h；保护组：细胞
正常培养 24 h 后，在含 SLWE（体积分数分别为
0.3%、0.6%、6%）水溶液培养基条件下培养 24 h，
2
最后，在功率密度 68 µW/cm ，照射距离 10 cm 条
件下，UVB 辐照 100 s 后，再培养 24 h。采用 CCK-8 [12]
检测 UVB 辐照对 HFF-1 细胞活率的影响。
1.7.2 SLWE 对 HFF-1 损伤保护组 ROS、MDA、
MMP-1 和 SOD 的影响
采用 DCFH-DA 法（活性氧检测试剂盒基于荧
光染料 DCFH-DA 的荧光强度变化）检测 ROS 含量；
MDA、MMP-1 含量测定参见试剂盒说明书；采用
WST-8 法检测 SOD 活力。
2 结果与讨论
2.1 SLWE 成分测定
采用高效液相色谱法对 SLWE 中的 V C 、槲皮
素、绿原酸、没食子酸及儿茶素类进行鉴定，高效
液相色谱图如图 1 所示，测定结果如表 1 所示。
[12]