Page 173 - 《精细化工》2021年第4期

第 4 期 董 坤，等: 草莓叶水提物对 UVB 致皮肤损伤的保护作用 ·807·

87.17%. More than volume fraction 3% SLWE aqueous solution could improve contents of HA, COLⅠand
HYP (p< 0.05) in HFF-1, and volume fraction 6% SLWE could decrease content of MMP-1 (p< 0.01),
suggesting that SLWE could skin moisture content, increase collagen content, inhibit collagen degradation,
and realize the effect of delaying aging. SLWE could effectively reduce ROS generated by UVB stimulation,
volume fraction 6% SLWE aqueous solution could significantly reduce MDA dosage, inhibit MMP-1
expression, and improve activity of SOD, which indicated that SLWE contributed to alleviating cell damage
caused by oxidative stress.
Key words: strawberry leaves water extract; UVB; human foreskin fibroblasts; damage protection; delaying
senescence; drug and cosmetic materials

成纤维细胞分泌的胶原纤维、弹性纤维及基质 性检测试剂盒（WST-8 法）、透明质酸（HA）试剂
成分，对维持皮肤正常生理状态具有重要意义。皮 盒，碧云天生物技术公司；丙二醛（MDA）检测试
[1]
肤经紫外线长期或大量照射后会引发光损伤 ， 剂盒、羟脯氨酸（HYP）试剂盒，南京建成生物研
UVB 刺激皮肤产生过多活性氧（ROS），激活细胞 究所；人Ⅰ型胶原蛋白（COLⅠ）酶联免疫检测试
氧化应激反应，脂质、蛋白质氧化、线粒体及 DNA 剂盒、人基质金属蛋白酶 1（MMP-1）试剂盒、人
受损、细胞膜通透性改变，成纤维细胞周期停滞和 基质金属蛋白酶 9（MMP-9）试剂盒，武汉华美生
凋亡，进而引起皮肤细胞外基质中的胶原蛋白、弹 物有限公司；人包皮成纤维细胞（HFF-1），中国科
性蛋白及透明质酸降解，造成组织损伤，加速皮肤 学院干细胞库；去离子水，自制。
老化 [1-2] 。目前，针对草莓的精深加工主要集中在草 Agilent 1220 Infinity Ⅱ高效液相色谱仪、Agilent
莓果实，而草莓叶作为草莓生产过程的副产品，大 ZORBAX Eclipse Plus C18 柱（250 mm×4.6 mm×
多采用填埋、焚烧等处理方式，存在环境污染等问 5 µm）、Agilent ZORBAX SB-Aq 柱（250 mm×4.6 mm×
题。针对不同叶龄的草莓叶制作的草莓叶保健茶研 5 µm），安捷伦科技(中国)有限公司；Infinite M200
究发现，其含有大量 V C 、鞣花酸、可溶性糖、原 PRO 酶标仪，瑞士 Tecan 公司；IX73 研究级荧光倒
花青素、槲皮素、儿茶素、游离氨基酸等，尤其是 置显微镜，奥林巴斯(中国)有限公司；LGJ-18 真空
V C ，其含量可高达每百克叶片 160~170 mg [3-4] ，具 冷冻干燥机，北京松源华兴科技发展有限公司；
有良好的抗氧化活性及延缓衰老功效。但目前针对 EB-160C/FC 手持式紫外灯，美国 Spectroline 公司。
草莓叶提取物相关功效评价的研究较少，作用机制 1.2 SLWE 制备
不明确。 将新鲜草莓叶置于真空冷冻干燥机中，在真空
本研究制备了草莓叶水提物（SLWE），并对其 度 100 Pa，功率 1400 W，–60 ℃条件下，干燥 24 h，
进行成分测定、抗氧化及延缓衰老功效评价，同时 冰上磨粉，过 100 目筛，得到草莓叶冻干粉。按料
探讨 SLWE 对 UVB 致成纤维细胞损伤保护机制， 液比 1∶20（g∶mL）加入草莓叶冻干粉和去离子
为其在延缓皮肤衰老方面的应用提供依据，推动草 水，在常温（20 ℃），60 Hz 条件下超声辅助浸提
莓副产品价值的深入挖掘和应用。 0.5 h 后，于 8000 r/min 离心 10 min，离心处理 2 次，
取黄绿色上清液，即为 SLWE，用孔径为 0.22 μm
1 实验部分
微孔滤膜过滤除菌，备用。
1.1 材料、试剂与仪器 1.3 SLWE 成分测定
草莓（Fragaria × Ananassa）叶片，北京欣宝 利用高效液相色谱仪对 SLWE 成分进行测定，
莱科技有限公司提供。 主要依据国标或卫生标准中的方法。以 V C 为例，其
甲醇、乙腈、乙酸、pH 2.5 磷酸水溶液（色谱 测试原理为：以 V C 标准品和去离子水制备不同质量
级）、盐酸氨基胍、牛血清白蛋白（BSA）、葡萄糖、 浓度的 V C 标准工作液，再对测试样以色谱峰的保留
甲醇、醋酸钠、无水三氯化铁（FeCl 3 ）、七水合硫 时间定性，通过外标法对其进行定量。
酸亚铁（ FeSO 4 •7H 2 O ）（以上均 为 AR ），美 国 按照 GB 5009.86—2016《食品安全国家标准食
Sigma-Aldrich 公司；DMEM 高糖培养基、磷酸缓冲 品中抗坏血酸的测定》第一法测定 V C 含量；按照《保
盐溶液（PBS），美国 Hyclone 公司；青链霉素混合 健食品检验与评价技术规范（2003 年版）》保健食
液（100×）、胰酶-EDTA、小牛血清（FBS）（以上 品功效成分及卫生指标检验规范第二部分（十六）
均为 AR），美国 Thermo Fisher 公司；细胞计数试剂 测定槲皮素含量；按照 GB/T 22250—2008《保健食
盒（CCK-8）、活性氧（ROS）试剂盒、总 SOD 活 品中绿原酸的测定》测定绿原酸含量；按照 GB/T