Page 84 - 《精细化工》2021年第8期
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·1578· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 38 卷
（BCI）越小，材料的止血效果越好，生成的凝血 1.5 生物相容性测试
块越紧密，BCI 可以通过不同时间段内形成血栓的 1.5.1 细胞毒性测试
红细胞比例来反映 [17] 。 采用 MTT 法进行细胞毒性的测试 [22] ，本文所
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材料全血凝血动力学的测定参照文献[18]。在 用细胞为 RAW264.7 巨噬细胞。将 1×10 个/mL 的
24 孔细胞培养板中放入 50 mg 止血材料，材料分别 细胞接种于 96 孔细胞培养板，并放置于 37 ℃体积
为普通纱布、PK0~PK2、速即纱（另外设置空白对 分数 5% CO 2 的培养箱中培养，当细胞吸附于培养
照为阴性对照组），并加入 200 μL 新鲜抗凝血液（枸 板底层且密度达到 80%~90%时，移除培养基并分别
橼酸钠抗凝采血管采集，由志愿者提供），37 ℃下 加入培养基质量 2.5%的不同止血材料（标准纱布、
恒温培养 5、8、10、15 和 20 min 后，加入 2 mL 去 PK0~PK2）的培养基浸提液（止血膜浸提液提前已
离子水胀破游离红细胞，共育 30 min 后，并在不同 无菌处理），放置于培养箱中培养。24 h 后，移除培
时间点取 200 μL 培养液，测量 540 nm 处的吸光度， 养基并用 PBS（pH=7.4）清洗细胞 2 次，随后向每
同时用酶标仪测定了实验 24 h 后培养液的 pH，每 孔加入 150 μL 质量浓度 0.5 g/L 的 MTT 试剂，继续
个样品重复 3 次。 放入培养箱中培养 4 h。最后去除 MTT 试剂并加入
根据文献[19]中提到的相对 BCI 计算方法，可 150 μL DMSO。当每孔中生成的甲瓒都被 DMSO 完
与相同配方、其他工艺所制得的 PVA/高岭土海绵类 全溶解后，将该 96 孔细胞培养板放在酶标仪中，测
止血材料的止血性能进行对比，按式（1）进行计算： 定各孔在 492 nm 处的吸光度。按式（2）计算细胞
c /% (A A ) / A 100 （1） 存活率，其中，未加任何止血材料的空白对照设为
h m h
式中：c 为相对 BCI，%；A h 、A m 分别为空白对照组 阴性对照，每组样品重复 3 次：
l / % A / A 100 （2）
（没有加任何材料）与实验组材料在 540 nm 下的吸 t c
式中：l 为细胞存活率，%；A t 、A c 分别为测试组与
光度。
空白对照组的吸光度。
1.4.4 凝血途径的激活
1.5.2 溶血率测试
凝血途径的激活主要是通过测量活化部分凝血
活酶时间（APTT）与凝血酶原时间（PT）来进行 [20] 。 止血膜溶血率的测试参照文献[23]的方法。血
液采集同 1.4.3，用生理盐水稀释 50 倍后，加入 50 mg
APTT 与 PT 主要反映了止血材料对止血途径的激活
止血膜（PK0~PK2）在 37 ℃下恒温培养 2 h，然后
作用，APTT 用于分析内源性止血途径的激活，PT
吸取 1 mL 样品，在 3000 r/min 下离心 10 min。取
测试则用于分析外源性止血途径的激活，二者测量值
越低，说明止血材料对止血途径的激活作用越强 [21] 。 100 μL 上层清液用酶标仪测量 540 nm 处的吸光度。
阴性对照为空白对照，阳性对照为 500 μL 质量分数
采用凝血分析仪来进行测试。抗凝猪血在
为 0.2% TX-100 溶液。采用式（3）计算溶血率，每
4400 r/min 下离心 15 min，获得贫血小板血 浆
个样品测量 3 次。
（PPP）。37 ℃预热 50 μL PPP、50 μL APTT 试剂、
h /% (A A ) / (A A ) 100 （3）
50 μL 0.025 mol/L 氯化钙溶液、20 μL 静电纺丝母液 s n p n
式中：h 为溶血率，%；A s 、A p 和 A n 分别为样品、
（ML0~ML2，质量分数为 0.01%）的水溶液，并加
阳性对照、阴性对照的吸光度。
入测量杯中进行 APTT 测试。37 ℃预热 50 μL PPP、
100 μL PT 试剂、20 μL 静电纺丝母液的稀释液 2 结果与讨论
（ML0~ML2，母液稀释在水中，其添加量为水质量
的 0.01%）的水溶液加入测量杯中进行 PT 测试。每 2.1 SEM 与元素分布分析
个样品重复 3 次。 对 PK0 与 PK2 进行了 SEM 测试，结果见图 1。
