Page 116 - 《精细化工》2022年第12期
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·2482·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 39 卷

            体的国家，因蛹虫草营养丰富、药食兼备，于 2006                          从影响蛋白质含量的提取方法、提取时间、pH、温
                                                  [5]
            年获得了国家卫生部“新资源食品”批文 。目前，                            度、提取次数以及影响多肽含量的酶、酶解时间、
            蛹虫草子实体已作为新食品原料应用到很多行业，                             温度、pH 条件入手，研究主要影响因素与目标产物
                                   [6]
            如虫草饮料、虫草酸奶等 。                                      含量之间的关系，对目标活性多肽进行初步分离和抗
                 蛹虫草生物活性成分种类多、含量丰富，既包                          氧化功能验证，为进一步研究蚕蛹虫草多肽及其作为
            含蛋白质、糖和脂肪等基本营养成分，又含有多种                             药物和功能性食品原料提供一定的理论基础。
            功能成分，如虫草素、虫草酸、虫草多糖等；此外，
            还含有 18 种氨基酸、多种维生素和 30 多种微量元                        1   实验部分
                                  [3]
              [6]
            素 。SINGPOONGA 等 研究发现，蛹虫草能抗疲
                                                               1.1    试剂与仪器
            劳、提高机体免疫力、抗炎、抗肿瘤，可作为一种
                                                                   蚕蛹虫草子实体干粉，由山西农业大学山西功
            新兴的中药材。生物活性肽来源广泛、易消化利用、
                                                               能食品研究院食用菌资源收集及开发利用创新团队
            安全性高，且具有降胆固醇、降血压、抗菌、抗氧
                                                               提供；酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、
                                                        [7]
            化等众多生物活性，因而成为食品领域研究的热点 。                           胰蛋白酶和胃蛋白酶），食品级，青岛海维森科技有
                 [8]
            宗静 分别采用水提醇沉法和酶解法得到了蛹虫草
                                                               限公司；DMEM 培养基、四甲基偶氮唑蓝（MTT），
            子实体多肽（质量分数达到 8%），对其组分进行了
                                                               北京索莱宝科技有限公司；McCoy's 5A 培养基，武
            分离纯化，并通过部分体外抗氧化活性实验证明此                             汉 Procell 生命科技有限公司；胎牛血清，美国 Gibco
                                                [9]
            多肽具有一定的抗氧化活性。钱卫文等 以蚕蛹为
                                                               公司；细胞用二甲基亚砜（DMSO），天津市天力化
            基质栽培了蛹虫草，经过脱脂、粉碎、加酶水解、
                                                               学试剂有限公司；96 孔细胞培养板，美国 Corning
            酶灭活、成品等步骤制得了一种可应用在功能性食                             公司；3 种细菌（金黄色葡萄球菌 ATCC 12600、枯
            品和农用生物制品等方面的虫草多肽。徐鸿雁等                       [10]
                                                               草芽孢杆菌 ATCC 29056、大肠杆菌 ATCC 23815），
            以蛹虫草子座热水浸提虫草素后的剩余物为原料，
                                                               山西大学生命科学学院菌种保藏中心；骨肉瘤 Sao-S
            没有经过蛋白质的提取，直接酶解分离得到了生物                             细胞株和膀胱癌 T24 细胞株，山西医科大学附属肿
            活性肽。JAKE 等       [11] 用液氮研磨蛹虫草，分别经过
                                                               瘤医院比较医学部。
            浸提、凝胶柱分离纯化等方法，最后从蛹虫草中分
                                                                   TU-1810 紫外-可见分光光度计，北京普析通用仪
            离提取到了天然活性肽 Cordymin，其具有广谱抗                         器有限公司；AXTGL 16M 台式高速冷冻离心机，盐
                                                       2+
            菌的能力以及不受某些矿质元素离子（如 Mg 和                            城市安信实验仪器有限公司；HR40-ⅡA2 型生物安全
               2+
            Zn ）影响的功能。综上所述，蛹虫草多肽具有多
                                                               柜，青岛海尔医用低温科技有限公司；311 CO 2 培养
            种生理功能，不仅有比蛋白质和氨基酸更好的消化
                                                               箱，德国 Thermo 公司；S433D 氨基酸分析仪，德国
            吸收性能，还有促进虫草素、多糖等功效成分的
                                                               sykam 公司；DSA100-SK2-4L 数控超声波清洗器，深
            吸收与转化，调节人体生理机能、预防疾病、增
                                                               圳德森精密设备有限公司；SunRise 酶标仪，奥地利
            强机体抵抗力、清除自由基、改善氮素吸收关系、
                                                               Tecan 公司。
            促进矿物质运输吸收，以及调节食品风味与质地                              1.2   方法
            等作用    [12] 。本课题组多年来从事蛹虫草菌种选育与                     1.2.1   蛋白质含量的测定
            功能因子挖掘研究，已获得多项成果                  [13-14] 。自培育         参照 GB 5009.5—2016 进行蛋白质含量的测定。
            所得蛹虫草菌株 GS-8（现保存于山西农业大学山                           1.2.2   多肽含量的测定
            西功能食品研究院菌种保藏室），蛹虫草子实体颜                                 利用双缩脲法进行测定           [16] 。
            色橘黄，菌柄粗细均匀，生长期短，子囊头大，生                             1.2.3   氨基酸的测定
            物学特性稳定遗传，与辽宁省现行的 5 个主要生产                               参照 GB 5009.3—2016 进行氨基酸的测定。
            品种（9906、抗大、988、青一和 582）相比较，                        1.2.4   蚕蛹虫草蛋白质提取液的制备
            主要营养成分均高于后者             [15] ，其中蛋白质含量高达            1.2.4.1   提取方法选择
            68%，氨基酸结构合理，根据联合国粮农组织/世界                               分别称取 5 g 蚕蛹虫草子实体干粉于 250 mL 三
            卫生组织（FAO/WHO）推荐的较理想蛋白质要求，                          角瓶中，按料液比 1∶20（g∶mL，下同）加入蒸馏
            该蛹虫草属优质蛋白质来源，对其进一步开发利用                             水，浸泡 0.5 h，然后缓慢加入 NaOH 溶液（0.1 mol/L）
            很有必要。                                              调节溶液 pH 至 8.0，分别置于超声波清洗器（功率
                 因此，本课题以自培育所得蚕蛹虫草子实体为                          100 W）和热回流提取装置，温度均为 50  ℃，提取
            研究对象，先提取蛋白质，再采用酶解法获得多肽，                            时间 0.5 h，提取 3 次，合并提取液，用 0.5 mol/L 盐
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