Page 121 - 《精细化工》2022年第12期

第 12 期 郭 尚，等: 蚕蛹虫草生物活性肽的制备及其性能分析 ·2487·

时蛋白质含量为 44.62%±0.01%。按照此最优条件进 结果见图 4b，其中，选取碱性蛋白酶∶木瓜蛋白酶=
行验证实验，蛋白质含量为 45.06%，高于正交实验 4∶3 为复合蛋白酶。由图 4b 可见，随着加酶量的增
中任一批次，表明正交实验取得了预期的效果。 大，多肽含量也不断增加，当加酶量增至 6000 U/mL
蛋白质提取方法常有渗透法、浸渍法、冻融法、 时，多肽含量达到最大，为 15.30%；但当加酶量继
均质法和溶剂萃取、超声破碎和纤维素酶法等 [33] 。 续增加时，多肽含量开始降低，可能是因为继续增
本文将超声辅助碱提酸沉法运用在蚕蛹虫草蛋白质 大加酶量会导致酶相互附着，降低酶与底物的传质
的提取上，具有操作便利、提取时间短、溶剂消耗 效率，反而降低反应效率。
小，产物含量高等优势。
2.3 酶解法制备蚕蛹虫草多肽工艺优化
2.3.1 蛋白酶的选择
按照 1.2.5.1 节实验方法，5 种蛋白酶在各自的
最适反应条件下对蚕蛹虫草蛋白质溶液进行了酶
解，结果见图 3。由图 3 可以看出，5 种酶对蚕蛹虫
草蛋白质的酶解效果有显著差异，对于蚕蛹虫草蛋
白质，碱性蛋白酶的酶解效果最好，蚕蛹虫草多肽
含量最高。考虑到单一酶解位点少，所以，采用水
解完多肽含量最高的 2 种酶进行复合酶水解，其中，
碱性蛋白酶和中性蛋白酶酶活力比为 1∶1 记为碱
性蛋白酶∶中性蛋白酶=1∶1，下同。由图 3 可见，
碱性蛋白酶∶木瓜蛋白酶=4∶3 时，蚕蛹虫草多肽
（简称为多肽）含量最高，为 15.68%，与孙崇臻 [34]
报道的结果一致。

图 3 不同蛋白酶水解对多肽含量的影响
Fig. 3 Effect of different protease hydrolysis on polypeptide
content

2.3.2 酶解单因素实验结果
蚕蛹虫草蛋白质酶解单因素实验结果如图 4a~b
所示。由图 4a 可知，pH 会对蚕蛹虫草蛋白质酶解
效果产生影响，在 pH 为 7.5 时，蚕蛹虫草蛋白质酶
解效果最好，多肽含量达到 16.70%，随着 pH 的继

续升高，多肽含量呈降低趋势，其主要原因是 pH
图 4 单因素实验结果
过高或过低会导致酶失活，从而影响活性位点的基
Fig. 4 Single factor analysis results of peptide in Cordyceps
团解离和底物的解离。多肽含量与加酶量也有关系， militaris