Page 153 - 《精细化工》2022年第6期
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第 6 期               张潇童，等:  含铁离子纳米络合物的制备及其诱导肿瘤细胞铁死亡作用                                   ·1219·


            失、外膜破裂，细胞核大小正常、但缺乏染色质凝                             螯合剂去铁胺（DFO），AR，美国 Supelco 公司；表
                     [1]
            聚等现象 。铁死亡机制主要依赖细胞内两个相互                             没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG），AR，上海阿拉
                                                       [2]
            抗衡的生化过程，即脂质过氧化的产生和消除 。                             丁生化科技股份有限公司；FeCl 3 •6H 2 O，AR，天津
            铁离子和多聚不饱和脂肪酸（PUFAs）作为脂质过                           市永大化学试剂开发中心；无水甲醇，AR，天津市
            氧化过程的原料推动铁死亡的发生，而以还原性谷                             富宇精细化工有限公司；N,N-二甲基甲酰胺（DMF），
            胱甘肽（GSH）作为底物的谷胱甘肽过氧化物酶 4                           AR，汕头市西陇化工股份有限公司；冰醋酸，AR，
            （GPX4）则反向调控铁死亡             [3-4] 。随着对铁死亡机          天津市博迪化工有限公司；浓硫酸、浓硝酸，AR，
            制研究的深入，研究人员发现，诱导癌细胞铁死亡                             天津市化学试剂三厂；甲醇，色谱纯，二甲基亚砜
            可以抑制癌细胞分化、迁移以及减少耐药性                     [5-11] 。   （DMSO），AR，天津市科密欧化学试剂有限公司；
                 表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）是绿茶                         人体宫颈癌细胞（Hela），宝生物工程（大连）有限
            中含量最高的多酚类物质            [12] ，EGCG 可以通过如 p53        公司；Hyclone   TM  DMEM(H)培养基、青霉素溶液、
            途径、STAT3 途径、Akt 途径等多种途径，调控促                        链霉素溶液、磷酸盐缓冲液（pH=7.2±0.2），北京索
            凋亡基因的上调和促凋亡蛋白的级联反应，以及抗                             莱宝科技有限公司；胎牛血清，德国 PAN-Biotech
            凋亡基因的下调，以此来诱导肿瘤细胞凋亡                     [13-18] 。  公司；噻唑蓝（MTT），BR，江苏凯基生物技术股
            金属离子在医药领域是另一类极具研究价值的物                              份有限公司。
            质，在各种疾病的诊断和治疗等方面起着重要的作                                 AS5150A 超声波清洗器，天津奥特塞恩斯仪器
            用。多酚分子和金属离子可以通过配位螯合作用在                             有限公司；ST 16R 高速冷冻离心仪，美国 Thermo
            水溶液中快速自组装形成金属 - 多 酚网络结构                            Fisher 公司；SB-2000 旋转蒸发仪，上海爱博仪器有
            （MPN）。近年来，这种金属-多酚网络结构开始作                           限公司；FD-5N 冷冻干燥机，日本 EYELA 东京理
            为一种多功能的表面涂层材料，广泛应用于仿生学、                            化器械株式会社；E2695 高效液相色谱仪，美国
            材料学和生物医学等领域，同时作为一种载药平台，                            Waters 公司；AVIO 500 电感耦合等离子体发射光谱
            使 MPN 结构在载药领域具有极高的潜在价值                   [19] 。    仪，美国 Perkin-Elmer 公司；ZS90 纳米粒径和 Zeta
                 综上，MPN 作为载药平台可实现多机制或多靶                        电位分析仪，德国 Malvern 公司；Tecan SPARK 多
            点的联合或协同的抗肿瘤作用。如图 1 所示，以具                           功能微孔检测仪，瑞士 Tecan 公司。
                                                                           Ⅲ
            有铁死亡诱导活性的索拉菲尼（SRF）为内核，基                            1.2    SRF@Fe EGCG 纳米络合物的制备
            于铁离子和多酚构建 MPN 结构将其包裹，铁离子可                              按文献[20]方法，在频率为 40 Hz 的超声条件下
            与 SRF 协同调控铁死亡，多酚选择具有抗肿瘤活性                          向 20 mL 去离子水中加入质量浓度为 40 g/L 的 SRF
                                   Ⅲ
            的 EGCG，制备 SRF@Fe EGCG 纳米络合物，并评                     溶液（溶剂 DMF）50  μL；随后，同时加入 60  μL
            价其抑制肿瘤细胞增殖活性。                                      质量浓度为 40 g/L 的 EGCG 水溶液和 50 μL 质量浓
                                                               度为 10 g/L 的 FeCl 3 •6H 2 O 水溶液，超声反应 5 min
                                                                                          3+
                                                               后，使 EGCG 中的—OH 与 Fe 自组装螯合在 SRF
                                                                                    Ⅲ
                                                               纳米晶体表面上形成 Fe EGCG 网络结构；在 8000
                                                               r/min 下离心 15 min，收集沉淀，沉淀经过多次去离
                                                                                             3+
                                                               子水洗涤除去多余的 EGCG 和 Fe 后，在–80  ℃下
                                                               冷冻干燥 3 h，制备出 1.3 mg SRF@Fe EGCG 纳米
                                                                                                 Ⅲ
                                                               络合物，后续按照文献的方法放大投药量制备。
                                                               1.3   粒径分布的测定
                                                                                   Ⅲ
                                                                   制备出 SRF@Fe EGCG 纳米络合物后，取
                                                               10 mg 该纳米络合物至 20 mL 去离子水中，超声使
                                                               其分散均匀，取 2~4 mL  SRF@Fe EGCG 纳米分散
                                                                                             Ⅲ

                          –
                        Xc 为胱氨酸/谷氨酸反向转运体                       液至样品槽中，室温下用纳米粒径和 Zeta 电位分析
                       图 1   纳米络合物制备示意图                        仪对纳米络合物进行粒径分布测定。
              Fig. 1  Schematic diagram of nanocomplexs preparation
                                                               1.4   Zeta 电位的测定
                                                                                   Ⅲ
            1   实验部分                                               制备出 SRF@Fe EGCG 纳米络合物后，取
                                                               10 mg 该纳米络合物至 20 mL 去离子水中，超声使
                                                                                           Ⅲ
            1.1   试剂与仪器                                        其分散均匀，取 2 mL  SRF@Fe EGCG 纳米分散液
                 索拉菲尼（SRF）、铁死亡抑制剂 Ferrostatin-1                至样品槽中，室温下用纳米粒径和 Zeta 电位分析仪
            （Fer-1），AR，安耐吉化学试剂有限公司；铁离子                         对纳米络合物进行电位分析。
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