Page 154 - 《精细化工》2022年第6期
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·1220· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 39 卷
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1.5 SRF@Fe EGCG 纳米络合物中 SRF 包封率和 加入 3~4 mL 浓硝酸，溶液变成淡黄色，待有机物
载药量的测定 全部溶解硝化后，用 25 mL 容量瓶定容，取少许溶
1.5.1 SRF 标准曲线的绘制 液进行电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES）
（1）色谱条件： 测定。
色谱柱为反相 C18 柱；流动相为 V(甲醇)∶V(水)= 1.7 细胞培养及纳米络合物体外细胞实验
70∶30 的混合液（含体积分数 2%的冰醋酸）；流动 将 Hela 细胞在含体积分数为 10%的胎牛血清、
相流速：1 mL/min；检测波长：254 nm；进样量： 100 IU/mL（IU 指 1 min 转化 1 μmol 底物的酶量）
20 μL；柱温：30 ℃。 青霉素和质量浓度为 100 g/L 的链霉素 DMEM(H)
（2）测定方法：将 SRF 溶于一定量的甲醇中， 培养基中于 37 ℃在体积分数为 5%的 CO 2 潮湿气氛
配制出 1000 μmol/L 的母液，分别稀释成浓度为 50、 中培养。将 Hela 细胞接种在 96 孔板（每孔 5×10 3
100、200、300、400、500、600 μmol/L 的 SRF 溶 个）中孵育 24 h，之后分 3 组，每组 4 复孔，每孔
液，并在 254 nm 波长下进行 HPLC 测定。用所测得 加入 50 μL 负载 6 μmol/L SRF 的 SRF@Fe EGCG 纳
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的峰面积为纵坐标，SRF 浓度（μmol/L）为横坐标， 米络合物，其中两组再分别加入 50 μL 15 μmol/L 的
绘制出 SRF 标准曲线，标准曲线方程为 Fer-1 或 40 μmol/L 的 DFO 与 Hela 细胞共同孵育
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y=27724.78008x– 263873.45467，R =0.99931。 24 h，每组均设置对照组、空白组。考察 Fer-1 和
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1.5.2 SRF@Fe EGCG 纳米络合物中 SRF 包封率的 DFO 自身毒性的细胞实验分为两组，分别为加入
测定 100 μL 7.5 μmol/L 的 Fer-1 或 20 μmol/L 的 DFO 与
参照文献[21]的方法。将 2.5 mg SRF@Fe Ⅲ Hela 细胞共同孵育 24 h，每组均设置对照组、空白
EGCG 纳米络合物超声分散在 20 mL 甲醇中，超声 组。之后每孔加入 20 μL MTT 反应 4 h，终止培养，
5 min 使负载的 SRF 溶于甲醇中，在 8000 r/min 下 吸出培养液并用 100 μL PBS 冲洗 3 次，每孔再加入
离心 10 min 后，取上清液过 0.2 μm 有机滤膜（尼龙 200 μL DMSO，振荡 5 min，放入多功能微孔检测仪
66），在 254 nm 波长下进行 HPLC 测定，将得到的 中，在 37 ℃、490/570 nm 下测定每孔吸光度（OD
峰面积带入所求得的标准曲线中计算得到 SRF 浓 值），通过式（3）计算 Hela 的细胞存活率。同时对
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度，进一步根据式（1）计算出 SRF@Fe EGCG 纳 15 μmol/L 的 Fer-1 以及 40 μmol/L 的 DFO 进行细胞
米络合物的包封率，每组平行 3 次。 毒性测定，排除 Fer-1 与 DFO 本身毒性对细胞活力
m 的干扰。
A / % 1 100 （1）
m 2 D /% OD OD 0 100 （3）
2
式中：A 为包封率，%；m 1 为 SRF@Fe EGCG 纳米 OD OD
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1 0
络合物中 SRF 的质量，g；m 2 为投入的 SRF 质量，g。 式中：D 为细胞存活率，%；OD 0 空白组的 OD 值；
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1.5.3 SRF@Fe EGCG 纳米络合物中 SRF 载药量的 OD 1 为对照组的 OD 值；OD 2 为实验组的 OD 值。
测定
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将 2.5 mg SRF@Fe EGCG 纳米络合物超声分 2 结果与讨论
散在 20 mL 甲醇中，超声 5 min 使负载的 SRF 溶于
2.1 粒径分析
甲醇中，在 8000 r/min 下离心 10 min 后，取上清液
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测得制备的 SRF@Fe EGCG 纳米络合物的平均
过 0.2 μm 有机滤膜（尼龙 66），在 254 nm 波长下进
粒径分布如图 2 所示。
行 HPLC 测定，将得到的峰面积带入所求得的标准
曲线中计算得到 SRF 浓度，进一步根据式（2）计
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算出 SRF@Fe EGCG 纳米络合物的载药量，每组平
行 3 次。
m
B / % 1 100 （2）
m 3
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式中：B 为载药量，%；m 1 为 SRF@Fe EGCG 纳米
络合物中 SRF 的质量，g：m 3 为测试用 SRF@Fe Ⅲ
EGCG 纳米络合物的质量，g。
3+
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1.6 SRF@Fe EGCG 纳米络合物中 Fe 质量分数
的测定
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图 2 SRF@Fe EGCG 纳米络合物的粒径分布
准确称取 2.5 mg SRF@Fe EGCG 纳米络合物，
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Fig. 2 Particle size distribution of SRF@Fe EGCG
加入 1 mL 浓硫酸加热使其变为红棕色或黑色后，再 nanocomplex
