Page 110 - 《精细化工》2023年第1期
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·102·                             精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 40 卷

                 板栗（Castanea mollissima  Bl.）具有悠久的栽            萜类、类黄酮和多酚等活性物质，是潜在的抑菌剂
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            培历史，中国栽植面积 1.8×10  m ，年产量 260 多                    来源。LAI 等    [17] 研究表明，黄芪水提物对 5 种痢疾
            万 t（占全世界产量的 84%）。板栗苞是板栗最外层                         病原菌均有轻度抑制作用，可与抗生素联合使用产
            针刺状外壳，又名栗蓬。随着板栗栽植面积及产量                             生拮抗作用。黄燕飞         [18] 和张子越  [19] 也分别研究了马
            的逐年增加，每年板栗成熟时节会产生大量的板栗                             齿苋和黄连水提物对痢疾杆菌的抗菌活性及抗菌机
            苞等板栗废弃物。由于开发利用不足，板栗苞被堆                             理，结果表明，马齿苋、黄连水提物均可抑制痢疾
            积在林地里或直接焚烧，造成巨大的环境污染及资                             杆菌的生长，破坏细菌的细胞壁和细胞膜，抑制痢
            源浪费    [1-2] 。据本草纲目记载，板栗苞具有止血、化                    疾杆菌的正常呼吸代谢。以往的研究都集中在提取
            痰、清热散结的功效，可治疗丹毒、百日咳、中风                             物抑制痢疾杆菌活性及机理的研究，未见板栗苞抑
                             [3]
            不语、便血及鼻衄 ；现代科学研究表明，板栗苞                             菌成分提取工艺优化的相关研究。
                                       [5]
                             [4]
            提取物具有抗氧化 、抗肿瘤 、抗病毒、抗菌                      [6-7] 、     本文以痢疾杆菌为指示菌，采用单因素实验探
                     [8]
            抗高血压 及降血糖          [9-10] 等活性。多酚及黄酮类化合             究乙醇体积分数、温度及料液比对板栗苞提取物抑
            物是板栗苞的主要活性成分。张琳等                  [11] 从板栗苞中       制痢疾杆菌活性的影响，通过响应面法优化板栗苞
            分离出槲皮素、山奈酚、大黄素、乌索酸、对苯二                             抑菌物质的提取工艺。此外，对板栗苞各相萃取物
            酚、鞣花酸、苯甲基-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、没食                        的抑菌成分含量进行测定，并比较其抑菌活性，筛
            子酸、莽草酸等多酚类化合物，其中鞣花酸和苯甲                             选得到活性最强的抑菌组分。以期为板栗苞等农业
            基-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 2 种化合物具有显著降血                      废弃物的研究及开发新型抑菌剂奠定基础。
            糖活性。CERULLI 等       [12] 研究表明，板栗苞因含有鞣
            花酸、酚葡萄糖苷衍生物、三萜类化合物和极性脂                             1   实验部分
            质而具有抗氧化和抗炎活性，后通过细胞体外实验
                                                               1.1   材料与仪器
            表明，其具有降低核因子-κB（NF-κB）表达和一氧                             板栗苞，2020 年 10 月采自河北省青龙县，经
            化氮（NO）生成的能力。目前，对板栗苞的化学成                            河北科技师范学院园艺学院齐永顺教授鉴定为中国
            分及抗氧化、抗炎活性研究报道较多，但对其抑菌
                                                               板栗，属壳斗科（Fagaceae）栗属（Castanea），洗
            活性报道较少。                                            净室外晒干，打粉过 40 目筛备用；痢疾杆菌（BNCC
                 据世界卫生组织统计，痢疾是导致儿童死亡的                          103609），北纳生物科技有限公司；LB 液体培养基、
            主要疾病之一       [13] 。造成痢疾的病原菌主要有以下 4                 环丙沙星，北京索莱宝科技有限公司；二甲基亚砜
            种：福氏志贺菌（Shigella flexneri）、痢疾志贺菌                   （DMSO），上海埃彼化学试剂有限公司；石油醚、
            （ Shigella dysenteriae ）、宋内志贺 菌（ Shigella          乙酸乙酯、正丁醇，分析纯，天津市富宇精细化工
            sonnei）和鲍氏志贺菌（Shigella boydii）。在发展中                有限公司；无水乙醇，分析纯，上海泰坦科技股份
            国家，痢疾志贺菌和福氏志贺菌较为常见，通常通                             有限公司；没食子酸（GA）、芦丁（rutin）、福林酚，
            过环境地表水源传播          [14] 。痢疾志贺菌是一种短小、               分析纯，上海源叶生物科技有限公司；无水碳酸钠、
            无芽孢、无荚膜、无动力、无鞭毛的兼性厌氧革兰                             NaNO 2 、Al(NO 3 ) 3 、NaOH，分析纯，天津市欧博凯
            氏阴性杆菌，在 SEM 中观察呈直杆状，形似其他肠                          化工产品销售有限公司。
            杆菌科，耐寒，可在普通琼脂培养基上生长，形成                                 ME204E 分析天平，梅特勒-托利多（上海）有
            的菌落为中等大小、半透明、光滑的圆点，在肠道                             限公司；HH-4 数显恒温水浴锅，江苏金坛荣华仪器
            杆菌培养基中形成无色菌落。兼性厌氧，可需氧产                             制造有限公司；EYELAN-1100 旋转蒸发仪，日本东
            生呼吸代谢，也可发酵代谢，产酸不产气，不能利                             京理化公司；Alpha 2-4  LDplus 冷冻干燥机，德国
            用柠檬酸或丙二酸盐，不产生 H 2 S。MATHAN 等                [15]   CHRIST 公司；3-18KS 冷冻离心机，德国 SIGMA
            表明，痢疾杆菌可引起传染性胃肠道疾病，是导致                             公司；JSP-200 金穗高速多功能粉碎机，浙江省永康
            儿童和成人腹泻病发和死亡的原因。因此，本文选                             市金穗机制造厂；SPECTRA MAX 190 型酶标仪，
            用痢疾志贺菌（简称痢疾杆菌）为研究对象。目前，                            美谷分子仪器有限公司；THZ-C-1 全温振荡器，苏
            常用喹诺酮类药物治疗痢疾，如环丙沙星、诺氟沙                             州市培英实验设备有限公司。
            星、氧氟沙星、左氧氟沙星、萘啶酸等。但这些药物                            1.2    实验方法
            会引起肠道菌群失衡诱发疾病，并导致痢疾杆菌产生                            1.2.1   原料预处理
            耐药性   [16] 。因此，亟需寻找新型抵抗痢疾杆菌的抑                          将板栗苞用蒸馏水洗净、自然环境晒干，用多
            菌剂。中国中药资源丰富，其提取物富含生物碱、                             功能粉碎机打粉，过 40 目筛，得到板栗苞粉末样品，
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