Page 112 - 《精细化工》2023年第1期
P. 112

·104·                             精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 40 卷

            1.2.8   痢疾杆菌生长曲线的测定                                出醇水溶液(双组分体系)提取物抗菌活性最好,可
                 采用吸光光度法       [24] 测定板栗苞各提取物对痢疾               对乙醇水溶液提取物抑菌活性进行进一步工艺优化。
            杆菌生长曲线的影响。将 OD 600 值为 0.1 的痢疾杆菌                    2.2    单因素实验结果与分析
            菌悬液,接种在新鲜培养基中,菌悬液与培养基体                             2.2.1   乙醇体积分数对板栗苞提取物抑菌率的影响
            积比 1∶1 混合,在 96 孔板中加入 100 μL 样品溶液                       按 1.2.3 节进行实验,考察乙醇体积分数对板栗
            (0.5 g/L,配制方法同 1.2.7 节)和 100  μL 痢疾杆               苞提取物抑菌率的影响,结果见图 2。
            菌与培养基的混合液;使用酶标仪测试 14 h 细菌在
            600 nm 处的吸光度值(OD 600 ),绘制细菌的生长曲
            线图。按式(3)计算抑菌率:
                                    A   A
                        抑菌率    /%   c   y    100    (3)
                                      A c

            式中:A c 表示痢疾杆菌溶液在 14 h 的 OD 600 值;A y
            表示样品处理后痢疾杆菌溶液在 14 h 的 OD 600 值。
            1.3   数据分析
                 所有实验均平行进行 3 组,取平均值作为板栗
            苞提取物抑菌率的响应值,通过方差分析来确定不
            同 因素对 抑菌 活性的 显著 性影响 。通 过使 用                               图 2   乙醇体积分数对抑菌活性的影响
                                                               Fig. 2    Effect  of ethanol volume fraction on antibacterial
            Design-Expert 8.0.6 软件对 Box Behnken 实验数据进
                                                                     activity
            行分析,得到工艺参数的二次回归方程。
                                                                   由图 2 可知,板栗苞提取物对痢疾杆菌的抑菌
            2   结果与讨论                                          率随乙醇体积分数的增加呈先增后降的趋势。当乙
                                                               醇体积分数为 50%时抑菌率达最大值,之后随乙醇
            2.1    溶剂对板栗苞提取物抑菌活性的影响
                                                               体积分数增加而逐渐下降。WENDAKOON 等                  [27] 发
                 按 1.2.2 节进行实验,通过吸光光度法比较板栗
                                                               现,啤酒花、合香叶、松萝提取物抑菌活性取决于
            苞水提物、板栗苞醇提物、板栗苞 50%乙醇水提物
                                                               乙醇的体积分数,可能由于不同乙醇体积分数提取出
            抗痢疾杆菌活性,结果如图 1 所示。                                 的抑菌成分不同,导致抑菌活性有差别。METROUH-

                                                               AMIR 等  [28] 表明,洋甘菊体积分数 50%乙醇水溶液
                                                               提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑制作用最
                                                               强,主要原因是提取物中多酚和黄酮类化合物含量
                                                               较高。HAYEK 等      [29] 研究表明,提取物中的酚类化
                                                               合物会干扰细菌膜结构的渗透屏障。根据实验结果,
                                                               选取乙醇体积分数为 40%~60%进行响应面优化。
                                                               2.2.2   料液比对板栗苞提取物抑菌率的影响
                                                                   按 1.2.3 节进行实验,考察料液比对板栗苞提取
                                                               物抑菌率的影响,结果见图 3。


                  图 1   不同溶剂对痢疾杆菌生长曲线的影响
            Fig. 1    Effects of different  solvents on  growth curve of
                   Shigella dysenteriae

                 由图 1 可以看出,痢疾杆菌遵循 S 型生长模型,
            0.5 g/L 不同提取物在 3 h 时对细菌生长出现抑制,
            50%乙醇水提物的抑制作用最显著。AMALRAJ 等                  [25]
            在对比不同溶剂对云杉叶提取物抗菌活性的研究中
            也表明,乙醇水提取物对普通变形杆菌、枯草芽孢
            杆菌和大肠杆菌有显著的抑制作用,由于其多酚和

            黄酮类化合物含量高,使细菌体内代谢失调,细胞膜                                      图 3   料液比对抑菌活性的影响
            及细胞壁破裂,从而抑制细菌生长                 [26] 。本研究也得        Fig. 3    Effect of solid-liquid ratio on antibacterial activity
   107   108   109   110   111   112   113   114   115   116   117