Page 112 - 《精细化工》2023年第1期
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·104· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 40 卷
1.2.8 痢疾杆菌生长曲线的测定 出醇水溶液(双组分体系)提取物抗菌活性最好,可
采用吸光光度法 [24] 测定板栗苞各提取物对痢疾 对乙醇水溶液提取物抑菌活性进行进一步工艺优化。
杆菌生长曲线的影响。将 OD 600 值为 0.1 的痢疾杆菌 2.2 单因素实验结果与分析
菌悬液,接种在新鲜培养基中,菌悬液与培养基体 2.2.1 乙醇体积分数对板栗苞提取物抑菌率的影响
积比 1∶1 混合,在 96 孔板中加入 100 μL 样品溶液 按 1.2.3 节进行实验,考察乙醇体积分数对板栗
(0.5 g/L,配制方法同 1.2.7 节)和 100 μL 痢疾杆 苞提取物抑菌率的影响,结果见图 2。
菌与培养基的混合液;使用酶标仪测试 14 h 细菌在
600 nm 处的吸光度值(OD 600 ),绘制细菌的生长曲
线图。按式(3)计算抑菌率:
A A
抑菌率 /% c y 100 (3)
A c
式中:A c 表示痢疾杆菌溶液在 14 h 的 OD 600 值;A y
表示样品处理后痢疾杆菌溶液在 14 h 的 OD 600 值。
1.3 数据分析
所有实验均平行进行 3 组,取平均值作为板栗
苞提取物抑菌率的响应值,通过方差分析来确定不
同 因素对 抑菌 活性的 显著 性影响 。通 过使 用 图 2 乙醇体积分数对抑菌活性的影响
Fig. 2 Effect of ethanol volume fraction on antibacterial
Design-Expert 8.0.6 软件对 Box Behnken 实验数据进
activity
行分析,得到工艺参数的二次回归方程。
由图 2 可知,板栗苞提取物对痢疾杆菌的抑菌
2 结果与讨论 率随乙醇体积分数的增加呈先增后降的趋势。当乙
醇体积分数为 50%时抑菌率达最大值,之后随乙醇
2.1 溶剂对板栗苞提取物抑菌活性的影响
体积分数增加而逐渐下降。WENDAKOON 等 [27] 发
按 1.2.2 节进行实验,通过吸光光度法比较板栗
现,啤酒花、合香叶、松萝提取物抑菌活性取决于
苞水提物、板栗苞醇提物、板栗苞 50%乙醇水提物
乙醇的体积分数,可能由于不同乙醇体积分数提取出
抗痢疾杆菌活性,结果如图 1 所示。 的抑菌成分不同,导致抑菌活性有差别。METROUH-
AMIR 等 [28] 表明,洋甘菊体积分数 50%乙醇水溶液
提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑制作用最
强,主要原因是提取物中多酚和黄酮类化合物含量
较高。HAYEK 等 [29] 研究表明,提取物中的酚类化
合物会干扰细菌膜结构的渗透屏障。根据实验结果,
选取乙醇体积分数为 40%~60%进行响应面优化。
2.2.2 料液比对板栗苞提取物抑菌率的影响
按 1.2.3 节进行实验,考察料液比对板栗苞提取
物抑菌率的影响,结果见图 3。
图 1 不同溶剂对痢疾杆菌生长曲线的影响
Fig. 1 Effects of different solvents on growth curve of
Shigella dysenteriae
由图 1 可以看出,痢疾杆菌遵循 S 型生长模型,
0.5 g/L 不同提取物在 3 h 时对细菌生长出现抑制,
50%乙醇水提物的抑制作用最显著。AMALRAJ 等 [25]
在对比不同溶剂对云杉叶提取物抗菌活性的研究中
也表明,乙醇水提取物对普通变形杆菌、枯草芽孢
杆菌和大肠杆菌有显著的抑制作用,由于其多酚和
黄酮类化合物含量高,使细菌体内代谢失调,细胞膜 图 3 料液比对抑菌活性的影响
及细胞壁破裂,从而抑制细菌生长 [26] 。本研究也得 Fig. 3 Effect of solid-liquid ratio on antibacterial activity