Page 89 - 《精细化工》2023年第9期
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第 9 期                   吴   凡，等:  查耳酮衍生物接枝改性的聚硅氧烷 UVA 滤光剂                               ·1937·


            1.2.2  WPUF 的合成                                    隔 5 min 取样 1 次，0.5 h 后每隔 0.5 h 取样 1 次，使
                 将 1.50 g PHMS、0.294 g（0.001 mol）Methoxy-      用紫外-可见分光光度计测定 250~420 nm 范围的吸
            Cha、5.00 g（0.0125 mol）APEG-400 和 20 mL 异丙          光度，共照射 4 h。
            醇加入 100 mL 三颈烧瓶中，并在 70 ℃下搅拌                        1.2.5   细胞毒性实验
            15 min。加入 0.15 mL 质量浓度为 0.5 g/L 氯铂酸异                   使用 HaCaT 细胞对 3 种不同取代基的查耳酮衍
            丙醇溶液，逐渐加热到 90 ℃并保持 6 h。冷却到室温                       生物以及 WPUF 进行细胞毒性实验，使用的培养基
            后加入 0.002 mol/L 的 NaOH 溶液 0.1 mL，在 40 ℃下           为 DMEM 高糖培养基。将 HaCaT 细胞悬浮液接种
            旋干溶剂，得到 WPUF。                                      于 96 孔板中，保证每孔 100  μL，每孔细胞数量约
                                                                   4
            1.2.3   表征方法                                       1×10 个。在 37 ℃、体积分数 5% CO 2 、相对湿度
                         13
                 1 HNMR、 CNMR 测试：对制备的 4-烯丙氧基                   95%的标准培养环境下培养 24 h 后去除培养基。向
            苯甲醛、Blank-Cha、Oxhydryl-Cha、Methoxy-Cha             分组的孔中加入配制好的梯度浓度样品的 DMEM
            进行测定，其中 Oxhydryl-Cha 使用 DMSO-d 6 为溶                溶液，每孔 100 μL，在同样的标准培养环境下继续
            剂，其余使用 CDCl 3 作为溶剂，TMS 为内标。                        培养 24 h 后去除培养基。最后，向每个孔里加入质
                 LC-MS 测试：配制质量浓度为 0.01~0.1 g/L 的               量浓度 0.3 g/L MTT 的新鲜 DMEM 溶液，每孔
            查耳酮衍生物甲醇溶液，经 LC-MS 检测。准分子离                         100 μL，避光培养 4 h，在观察到细胞中生成蓝紫色
            子峰作为产物结构鉴定的依据（ESI，m/Z）。                            晶体后去除培养基，每孔中加入 100 μL DMSO，充
                 FTIR 测试：对 Methoxy-Cha、APEG-400、PHMS、          分振荡溶解甲瓒结晶后，使用酶标仪测定每孔内甲
                                                        –1
            WPUF 进行 FTIR 测试，波数范围为 4000~500 cm ，                瓒溶液在 570 nm 处的吸光度，用式（3）计算细胞
            扫描 16 次。                                           存活率（%）：
                 UV 吸收光谱测试：根据 SHAATH            [33] 报道的世                               OD
                                                                          细胞存活率/%=         exp  ×100    （3）
            界各国允许使用的紫外滤光剂化学光学性质测试方                                                      OD
                                                                                           ctr
            法，以无水乙醇为溶剂，将原料配制成 4.54×                            式中：OD exp 为实验组吸光度；OD ctr 为对照组吸光度。
              –5
            10  mol/L 的溶液，在波长 250~420 nm 内进行测定，                1.2.6   体外皮肤穿透实验
            绘制紫外吸收曲线，根据朗伯-比尔定律公式（1）
                                                                   取一块完整的猪皮，用镊子去除表面的细毛，
            分析计算各项 UV 参数：
                                                               用手术刀去除皮下脂肪。猪皮冲洗干净后，用锡纸
                             A=lg(1/T)=Kbc            （1）      包裹，并在–20 ℃下储存。处理后的猪皮用 PBS 解
            式中：A 为吸光度；T 为透光率，%；K 为摩尔消光                         冻 20 min，角质层朝上，PBS 不没过角质层即可，
            系数，也可用 ε 表示，L/(mol·cm)；b 为吸收层厚度，                   解冻后切成所需大小（约 2.5 cm× 2.5 cm 正方形）。
            cm；c 为待测物质的浓度，mol/L。
                                                               测试使用单层猪皮，猪皮上有角质层的一面朝向供
                 WPUF 稀释成质量浓度为 0.4 g/L 的溶液，进行
                                                               体腔。受体室内加满 PBS（含质量分数 5%的吐温
            UV 吸收光谱与稳定性 UV 吸收光谱测试，临界波长                         80）。供体腔内加入 1 g 以尼罗红标记的甲氧基肉
            用式（2）进行计算：                                         桂酸乙基己酯和 1 g 以 5-羧基荧光素标记的 WPUF

                                    C   A ()d              用于测试对猪皮的渗透性。每组 3 个平行样品。受
                            90%   290                 （2）     体室在 37 ℃的水浴中维持 12 h，实验期间搅拌速率
                                   400
                                   290  A                    为 300 r/min。12 h 后将猪皮从扩散池中取出。剩余
                                       ()d
            式中：λ C 为临界波长，nm；A 为吸光度；λ 为波长，nm。                   样品通过洗涤和用脱脂棉轻轻擦拭猪皮表面去除。
            1.2.4   WPUF 的稳定性测试                                把猪皮用冷冻切片机切成 20 μm 厚的切片，通过激
                 溶液配制：以无水乙醇为溶剂，将 WPUF 配制                       光共聚焦显微镜对其截面荧光强度及深度进行表征
            成质量浓度为 0.4 g/L 的溶液待用。                              分析。5-羧基荧光素激发波长为 488 nm；发射波长
                 储藏稳定性测试：将密封好的溶液置于避光、                          为 520~530 nm。尼罗红激发波长为 530 nm；发射波
            相对湿度 50%±10%的室温环境下，每个月取样 1 次，                      长为 571~741 nm。
            使用紫外-可见分光光度计测定 250~420 nm 范围的                      1.2.7   防晒指数（SPF）测试
            吸光度。储存 6 个月。                                           在特制的 PMMA 板的磨砂面上分别均匀涂抹
                                                                                                  2
                 热稳定性测试：将密封好的溶液置于 90 ℃的环                       聚硅氧烷-15 和 WPUF 试样 2 mg/cm ，避光晾干
            境下加热，每隔 2 h 取样 1 次，使用紫外-可见分光                       30 min 后，在 PMMA 板上方 10 mm 处，利用紫外
            光度计测定 250~420 nm 范围的吸光度。加热 12 h。                   线分析仪在 250~450 nm 波长范围内测定板上的 5
                 光稳定性测试：使用模拟太阳灯，以太阳强度                          个位置，平均值为该板上防晒剂的 SPF，每块板进行
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            0.2 mW/cm 稳定照射密封好的溶液，前 0.5 h 内每                    3 次平行检测，最终平均值表示为防晒剂的最终 SPF。
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