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·2084· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 35 卷

(17-C), 56.52 (9-C), 57.50 (14-C), 71.71 (3-C), 得到苯环上拥有不同取代基团的 C-17-苯并咪唑基
119.77 (7-C), 121.39 (4-C), 122.35 (6-C), 126.01 甾体化合物 5a~5i。在合成过程中，化合物 3 与二氯
(6-C), 127.68 (5-C), 135.30 (9-C), 138.25 (8-C),
–1
140.80 (5-C), 171.41 (2-C); IR (KBr), ν/cm : 3346, 亚砜反应时在无水无氧条件下进行。由于化合物 4
2932, 2852, 1658, 1511, 1280, 1040, 734, 608; 是一个酰氯，化学性质比较活泼，因此化合物 4 生
+
HREIMS, m/Z: 419.3066 [M+H] (calcd for 成后不经提纯直接与不同的邻苯二胺衍生物反应，
C 28 H 38 N 2 O,419.3062 )。 得到产物 5a～5i。5a～5i 进一步在碱性条件下脱去
1.3 MTT 实验方法 C-3-位乙酰基得到目标产物 6a～6i, 合成的这 18 个
4
将细胞以约（3~4）×10 个/mL 的密度接种于 含有苯并咪唑杂环基取代的甾体化合物均为文献中
96 孔板，每孔接种 200 μL，置于 CO 2 培养箱中培养 未见报道的化合物。
24 h，按预设的浓度梯度（5, 10, 20, 40, 80, 160 μmol/L） 在化合物 5a 的数据中，化学位移 6.79~7.18 处
加入待测样品，每一梯度设 3 个平行孔，同时设只 出现了 4 个苯环上的氢。相应的 CNMR 中，在 170.6
13
含培养基的空白对照孔和只含培养基及细胞的阴性 处出现了苯并咪唑环中-C==N 的碳化学位移，由此

对照孔。在 CO 2 培养箱中于 37 ℃培养 72 h 后，每 说明甾核的 C-17-位羧基已和邻苯二胺反应，生成
孔加入 20 μL 的 MTT（溴化噻唑蓝四氮唑）溶液（将
了 C-17-苯并咪唑甾体化合物。
250 mg MTT 粉末溶于 50 mL PBS 溶液得到 5 g/L 的
与化合物 5a 相比，化合物 6a 在化学位移
MTT 染色液），然后在二氧化碳培养箱中继续温育
4.58~4.68 低场处出现的 3-αH 的多重峰移到了高场
4 h。抽取上清液后加入 200 μL 的 DMSO，振荡 13
的 3.46~3.61，并且在化合物 5a 的 CNMR 中，化
10 min 溶解沉淀, 随后用酶标仪测定 OD（光密度）
学位移 171.6 处的-C==O 吸收峰已经消失，说明 3β-
值。通过下式求出一定浓度样品对细胞的抑制率。
对 OD－（照 OD －空白 ）（给 药 OD－ 空白 OD） 乙酰氧基中的乙酰基已经脱掉，转换成为 6a 的 3β-
抑制率 /%= ×100
对 照 OD－空 白 OD 羟基。
然后以抑制率对药物浓度作图，求出每个样品 类似地，其他化合物的结构得到了相应的结构
的 IC 50 值。 确证。
2.2 体外抗增殖活性测试
2 结果与讨论
分别采用 KB、HeLa、HepG、CNE-2、BT474
2.1 结构表征与讨论 和 SKOV3 细胞株作为测试对象，对部分合成物进
含苯并咪唑杂环的孕烯醇酮衍生物中，以孕烯 行体外抑制肿瘤细胞生长增殖活性筛选，结果见表 1。
醇酮为原料，通过 3'β-羟基保护，得到化合物 2，化 另外，5g、h 和 6g、h 在所有被测试肿瘤细胞中的 IC 50
合物 2 与溴素、NaOH 反应，得到 C-17-羧酸产物 3。 均>80 μmol/L，故在表 1 中没有列出。
化合物 3 与二氯亚砜反应得到 C-17-酰氯化合物 4， 从表 1 结果分析，所测试的不同结构苯并咪唑
4 没有分离直接与带有不同取代基的邻苯二胺反应， 甾体化合物对 SKOV3 细胞表现出明显的选择性抑

表 1 部分甾体苯并咪唑化合物的体外抗增殖活性（IC 50 , μmol/L）
Table 1 Antiproliferative activity of steroidal benzimidazole compounds in vitro (IC 50 , μmol/L)
Comp. HeLa HEPG2 CNE-2 KB BT474 SKOV3
5a >80 >80 65.1 ND >80.0 75.8±9.1
5b >80 >80 >80 >80 >80.0 76.3±5.7
5c >80 >80 >80 ND 34.6±2.2 15.4±3.8
5e >80 >80 >80 ND >80.0 76.0±9.5
5f >80 >80 ND >80 >80.0 77.9±12.3
5i 67.8±5.2 76.4±6.5 >80 ND >80.0 >80.0
6a 65.7±7.5 55.3±4.3 >80 >80 67.2±2.2 45.2±3.6
6b >80 66.8±7.8 43.7±2.2 >80 58.8±2.2 57.4±1.2
6c 70.3±2.4 53.7±2.2 ND ND 44.6±2.2 9.2±0.6
6e >80 65.4±2.2 44.8±2.2 ND 67.5±2.2 54.4±2.7
6f 55.5±6.3 >80 ND >80 78.6±2.2 37.6±1.6
6i ND >80 56±2.2 >80 72±2.2 >80.0
顺铂 12.9±2.2 9.4±0.6 12.7±1.5 8.2±0.6 14.3±0.7 12.5±1.7
注：各种肿瘤细胞是在 37 ℃，φ(CO 2) = 5%恒温箱中培养，以 MTT 法进行体外抑制活性测试。