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·1164· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 35 卷

恶性肿瘤是全球致死率最高的一类疾病，是人 科学学院任毅教授鉴定为毛茛科铁棒锤的根茎；
[1]
类健康的第二大“杀手” 。在中国，每年新增癌 HepG2（肝癌细胞株，来源于 ATCC），武汉中国典
[2]
症患者 160～170 万，同时约有 100 万人死于癌症 ， 藏物培养中心，采用含质量分数 10%小牛血清（CS）
随着人口的增长和老龄化，这个数字还在逐年增加， 的 RPMI 1640 培养基用贴壁细胞法培养，经质量分
因此恶性肿瘤的防治工作刻不容缓。如今抗肿瘤药 数 0.25%胰酶消化可为实验使用或传代；胰酶，
物的研究工作已取得很大进展，但这些药物在治疗 Difcd；RPMI 1640 培养基、小牛血清，美国 Gibco
肿瘤的同时会产生不同程度的副作用，例如骨髓抑 公司；DMSO、MTT，日本 Sigma 公司；PI、Annexin
[3]
制、免疫功能低下和白细胞减少等 。而天然药物 V-FITC 试剂盒，精美生物公司；台盼蓝，上海贝基
在减轻临床症状、提高生存质量、防止复发转移、 生物科技有限公司。
延长生存期和增效减毒等方面都具有很好的效果， 超纯水仪，Millipore；TDL-5 台式离心机，上
因此制备特异性强、毒性低的新型天然抗肿瘤药物 海安亭科学仪器厂；CO 2 孵箱，德国 Heraeus 公司；
[4]
已成为当今抗肿瘤药物研究的重要方向 ，大量研 37XB 倒置显微镜，上海豫光仪器有限公司；酶联免
究表明生物碱具有显著的抗肿瘤活性 [5-7] 。
疫检测仪，美国 Bio-rad 公司；激光共聚焦扫描显微
药理研究表明乌头属植物具有抗肿瘤作用，用 镜，德国 Leica 公司；流式细胞仪（FACS），美国
中药乌头提取精制的乌头注射液有抑制癌瘤生长和
Becton-Dickinson 公司。
癌细胞自发转移的作用，临床用于治疗晚期胃癌等 1.2 方法
消化系统恶性肿瘤 [8-9] 。乌头注射液对肝癌也有一定
1.2.1 化合物的提取与分离
疗效，临床用于晚期原发性肝癌能抑制肝癌细胞的
3-乙酰乌头碱和宋果灵的提取、分离方法按照
有丝分裂，并且能缓解消化道症状、增加食欲、镇 13
痛 [10-11] 。在民间，鞘柄乌头、白喉乌头等乌头属植 文献[18-19]进行，其结构经 XRD、IR 和 CNMR，
物被用于肿瘤的治疗，疗效显著 [12] 。 DEPT 和 C—H COSY 分析鉴定为 3-乙酰乌头碱和宋
[18-19]
铁棒锤为毛茛科乌头属植物铁棒锤（Aconitum 果灵 ，结构如下所示，经高效液相色谱检测纯
度大于 95%。
Pendulum Busch.）和伏毛铁棒锤（Aconitum flavum

Hand-Mazz.）的干燥块根，主要分布在西藏、四川
西部、青海、甘肃、陕西及河南 [13-14] ，其主要有效
成分为各类生物碱，具有抗炎、镇痛、镇静、解热、
免疫抑制、抗肿瘤和扩张血管等作用，具有较高的
药用价值 [15-16] 。目前，国内外对铁棒锤的研究主要
集中在抗炎、镇痛方面，而对其抗肿瘤作用的研究
较少。郝文婧 [17] 从铁棒锤中分离得到单体化合物尼
奥灵、14-O-乙酰新乌宁碱、宋果灵、12-表-欧乌碱、
12-表-脱氢欧乌碱，采用 MTT 法研究发现其对人胃
癌 SGC-7901、肝癌 HepG2、肺癌 A549 细胞的生长
有抑制作用。
前人只是采用 MTT 方法简单地研究了宋果灵
的抗肿瘤活性，而且没有对 3-乙酰乌头碱的抗肿瘤
活性进行研究。本文从铁棒锤总生物碱中分离得到
3-乙酰乌头碱和宋果灵，应用 MTT 法研究了药物的
细胞毒性、从细胞形态学观察细胞形态和分析细胞

凋亡、流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期等，从 1.2.2 MTT 法观 察 3- 乙酰乌 头碱和 宋果灵对
多方面对 3-乙酰乌头碱和宋果灵抑制人肝癌 HepG2
HepG2 细胞生长的毒性作用
的生理活性进行研究，以期为铁棒锤中 3-乙酰乌头
参考文献[20]的方法，实验分为阴性对照组和
碱和宋果灵在抗肿瘤方面的开发和利用提供参考，
给药组，给药组中 3-乙酰乌头碱和宋果灵的终质量
为寻找抗肿瘤药物的先导化合物奠定基础。
浓度分别为 1、4、16、64 mg/L。
1 实验部分 1.2.3 3-乙酰乌头碱和宋果灵对 HepG2 细胞形态的
影响
1.1 材料与仪器 参考文献[21]的方法，实验分为阴性对照组和
铁棒锤采自陕西太白山，由陕西师范大学生命 给药组，铺板 36 h 后加药，给药组中 3-乙酰乌头碱