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第 7 期 孙建瑞，等: 铁棒锤中 3-乙酰乌头碱和宋果灵抗肿瘤活性 ·1165·

和宋果灵终质量浓度分别为 1、4、16 mg/L，阴性 增殖均有不同程度的抑制作用，并且随着其干预浓
对照组给等体积 PBS。 度的增加及作用时间的延长，具有明显的时间-效应
1.2.4 流式细胞术观察 3-乙酰乌头碱和宋果灵对 和剂量-效应关系。当 3-乙酰乌头碱和宋果灵在相对
HepG2 细胞凋亡率的影响 已有报道较低的干预浓度情况下，对 HepG2 细胞生
参考文献[22]的方法，实验分为阴性对照组、 长的抑制作用比较显著，当其质量浓度达到 64 mg/L
3-乙酰乌头碱组（终质量浓度分别为 0、25、50、 时对 HepG2 细胞的抑制率分别为 93.56%和 98.48%。
100 mg/L）和宋果灵组（终质量浓度分别为 0、6、 因此，3-乙酰乌头碱和宋果灵可能是抑制 HepG2 细胞
30、60、120 mg/L），阴性对照组给等体积溶媒。 生长的潜在药物，并且作用效果明显，说明 3-乙酰
1.2.5 流式细胞术观察 3-乙酰乌头碱对 HepG2 细胞 乌头碱和宋果灵是抑制 HepG2 细胞增殖的理想药物。
周期的影响
4
1
取对数生长期的 HepG2 细胞以 110 mL 的密
度接种于六孔板中，于含体积分数 5% CO 2 、37 ℃
培养箱中培养。24 h 后给药，阴性对照组加等体积
溶媒（PBS），给药组加不同浓度的 3-乙酰乌头碱，
使终质量浓度分别为 0、25、50、100 mg/L，然后
于体积分数 5% CO 2 、37 ℃二氧化碳培养箱中培养
48 h。取不同浓度给药组细胞，离心、收集细胞，
PBS（pH=7.2）洗涤 2 次，加入 4 ℃预冷的体积分
数 70%冰乙醇（溶剂为 PBS），制成单细胞悬液，4 ℃

过夜。24 h 后离心弃固定液，用 4 ℃预冷的 PBS 漂
图 1 3-乙酰乌头碱质量浓度对 HepG2 细胞生长的影响
6
1
洗 2 次，调整悬液细胞浓度至 110 mL 。加入 1 g/L
Fig. 1 Effect of mass concentration of 3-acetylaconitine on
的 RNase 80 μL/管，振荡混匀，37 ℃水浴 30 min， the proliferation of HepG2
置冰上 2 min 终止 RNase 作用。加入 0.1 g/L 的 PI
（碘化丙啶）l mL，振荡混匀，避光染色 30 min 以
上。转入 FCM 测量管，在流式细胞仪上检测细胞凋
亡峰及细胞周期时相分布。
1.2.6 激光共聚焦显微镜检测 3-乙酰乌头碱和宋果
灵对 HepG2 细胞的凋亡影响
参考文献[23]的方法，培养 HepG2，当细胞融
合度达 80%时，加 3-乙酰乌头碱（质量浓度为 25、
50、100 mg/L）和宋果灵（质量浓度为 6、30、60、
120 mg/L）作用于 HepG2 细胞。激光共聚焦扫描显

微镜下观察细胞形态，测定采用双通道激发，PI 激 图 2 宋果灵质量浓度对 HepG2 细胞生长的影响
发波长 488 nm，发射波长 595 nm；Annexin V-FITC Fig. 2 Effect of mass concentration of songorine on the
激发波长 488 nm，发射波长 650 nm [24] 。 proliferation of HepG2
1.3 统计学分析
2.2 3-乙酰乌头碱和宋果灵对 HepG2 细胞形态的
应用 SPSS 13. 0 软件包进行分析，实验数据用
影响
x±s 表示，采用 t 检验，p<0.05 为统计学有显著差异。
3-乙酰乌头碱和宋果灵在质量浓度 0、1、4 和
2 结果与讨论 16 mg/L 剂量下作用于 HepG2 细胞 48 h 后细胞形态
的变化见图 3、4。
2.1 3-乙酰乌头碱和宋果灵对 HepG2 细胞增殖的 如图 3a 和 4a 所示，正常情况下，HepG2 细胞
影响 生长良好，呈卵圆形或多角型，细胞贴壁好，增殖
3-乙酰乌头碱和宋果灵作用于 HepG2 后对 旺盛，球形及脱壁细胞极少见。如图 3b~d 所示，经
HepG2 细胞生长的影响见图 1 和图 2。 质量浓度 1、4 和 16 mg/L 的 3-乙酰乌头碱作用后，
如图 1 和 2 所示，3-乙酰乌头碱和宋果灵在 1~ HepG2 细胞形态出现系列形态学改变：折光性变弱，
64 mg/L 质量浓度范围内对体外培养的 HepG2 细胞 轮廓增强，胞质收缩，细胞间隙增加，突起变短，