Page 112 - 《精细化工》2019年第11期
P. 112

·2260·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                  第 36 卷

            豆根茎干粉质量，g。y 1 为金雀花碱得率，%；y 2 为                      光度，ABTS·清除率计算公式如下               [23] ：
            苦参碱得率，%；y 3 为氧化苦参碱得率，%；y 4 为                               η ABTS ·/%=〔1－(A 1 －A 2 )/A 3 〕×100   （4）
            N-甲酰基金雀花碱得率，%。                                     式中：A 3 为 2 mL ABTS·溶液+2 mL 无水乙醇的吸
            1.4    微波控温辅助超声提取工艺的优化                             光度；A 1 为 2 mL 样液+2 mL ABTS·溶液的吸光度；
            1.4.1    单因素实验设计                                   A 2 为 2 mL 样液+2 mL 无水乙醇的吸光度。
                                                                                          –
                 在 1.2 节的实验条件下，以微波控温辅助超声                       1.5.3    对超氧阴离子自由基(O 2 ·)清除效果
            提取时间、微波加热温度、超声功率、乙醇体积分                                 邻苯三酚在弱碱条件下发生自氧化反应产生
                                                                –
                                                                     –
            数为影响因素，以总生物碱得率为评价指标，对微                             O 2 ·，O 2 ·清除剂能使邻苯三酚自氧化产物在 325 nm
            波控温辅助超声提取工艺进行了优化，每个单因素                             处吸收峰强度受抑制。取 4.5 mL pH=8.35 的 2 mmol/L
            进行 3 次平行实验。                                        磷酸盐（PBS）缓冲液，分别加 0.1 mL 不同质量浓
            1.4.2    响应面设计及分析                                  度提取液（0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0  g/L）和
                 采用响应面（Box-Behnken）设计，对管萼山豆                    V C 溶液（0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/L），再加
            根茎中总生物碱得率影响的显著因素进行了优化，                             入 0.4 mL 8 mmol/L 邻苯三酚水溶液，混匀，25 ℃
            并对数据进行二次多项式回归拟合，建立自变量数                             保温，5 min 时加入 1 滴 10 mol/L HCl 终止反应，在
                                                                                     –
            学模型，结合方差分析、各因素水平及其交互作用                             325 nm 处测吸光度值。O 2 ·清除率计算公式如下              [24] ：
                                                                          –
            评价结果，确定总生物碱最佳提取条件，并根据回                                     ηO 2 ·/%=〔1–(A 1 –A 2 )/A 3 〕×100   （5）
            归方程绘制响应曲面图。                                        式中：A 3 为未加样液的邻苯三酚的吸光度值；A 1 为
            1.5   抗氧化活性的测定                                     待测样液吸光度值；A 2 为未加邻苯三酚的样液吸光
            1.5.1    对 DPPH 自由基清除效果                            度值。
                 采用 DPPH 法   [21-22] 测定管萼山豆根茎总生物碱              1.6    数据分析
            的抗氧化能力。由于自由基清除剂会与 DPPH 的单                              采用 OriginPro8.5 软件绘图，采用 Design Expert
            电子对配对使其吸收逐渐褪色，褪色程度与自由基                             8.05b 软件对实验数据进行多元回归拟合分析。
            清除剂的电子数量呈定量关系。所以，可利用紫外
            分光光度计测得 DPPH·在 517 nm 处的吸光值的变                      2   结果与讨论
            化来评价总生物碱的抗氧化能力。称取一定量的
                                                               2.1   单因素实验优化不同条件对总生物碱得率的影响
            DPPH，用无水乙醇溶解，配制成 0.1 mmol/L DPPH·溶
                                                                   固定提取方法（提取时间 37.8  min、微波加热
            液。在试管中加入 2 mL DPPH·溶液，然后分别加
                                                               温度 64.5 ℃、超声功率 575 W、乙醇体积分数 95%）
            入 2 mL 不同质量浓度提取液（0.1、0.2、0.4、0.6、
                                                               进行生物碱提取，图 1 为生物碱 HPLC 图。从图中
            0.8、1.0 g/L）和 V C 溶液（0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、
                                                               可以看出，除去 5 min 之前的溶剂峰，4 种标准品的
            1.0 g/L），混合摇匀，室温避光静置 30 min，在 517
                                                               峰面积占比 81%。因此，后续实验采用这 4 种生物
            nm 处测量吸光度值，DPPH·清除率计算公式如下：
                                                               碱的得率之和作为总生物碱得率。
                    η DPPH ·/%=〔1－(A 1 －A 2 )/A 3 〕×100  （3）
            式中：A 3 为 2 mL DPPH·溶液+2 mL 无水乙醇的吸
            光度；A 1 为 2 mL 样液+2 mL DPPH·溶液的吸光度；
            A 2 为 2 mL 样液+2 mL 无水乙醇的吸光度。
            1.5.2    对 ABTS 自由基清除效果
                 ABTS 在过硫酸钾作用下氧化成 ABTS 自由基
            （ABTS·），在抗氧化物存在时 ABTS·的产生会被
            抑制，在 ABTS 最大吸收峰 734 nm 处测定其吸光度
            即可测定样品的抗氧化能力。将配制好的5 mL 7 mmol/L
            ABTS·溶液和 5 mL 2.5 mmol/L 过硫酸钾溶液混合，

            在室温、避光条件下静置 12  h，得到 ABTS·实验                                    图 1    样品的 HPLC 谱图
            储备液。用无水乙醇稀释 ABTS·实验储备液为起                               Fig. 1    HPLC chromatogram of alkaloid sample

            始吸光度的 0.2 倍。取 2  mL 不同质量浓度提取液                      2.1.1    提取时间对总生物碱得率的影响
            （0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/L）和 V C 溶液（0.1、             准确称取管萼山豆根茎干粉 30 g，按 1∶7 的料
            0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/L）分别加入 2 mL ABTS·稀           液比加入 95%（体积分数）乙醇，微波加热温度为
            释液混合，避光反应 6 min，测定在 734 nm 处的吸                     50 ℃，超声功率 600 W，考察了提取时间对管萼山
   107   108   109   110   111   112   113   114   115   116   117