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·462·                             精细化工   FINE CHEMICALS                                  第 36 卷

                 compositions; biological engineering
                 Foundation item: National Science and Technology Support Program (2017YFD0401204-5)


                 蓝莓果实中含有丰富的花青素、维生素、黄酮                          乙腈、甲醇、乙醇均为色谱纯，美国 Fisher 公司；
                       [1]
            等活性成分 。其中，花青素是一类水溶性天然色                             超纯水（过 0.45 μm 滤膜），天津市科密欧化学实剂
            素，属于多酚类化合物，在植物细胞液中多以糖苷                             有限公司；大豆卵磷脂（LLS）、硫代巴比妥酸
                               [2]
            键形成花色苷而存在 。花色苷具有抗氧化、抗肿                             （TBA）、三氯乙酸（TCA），国际集团化学实剂有
                             [3]
            瘤、防衰老等功效 。关于蓝莓的研究主要集中在                             限公司；HepG2 肝癌细胞、A549 肺癌细胞和 Hela
            花色苷提取和组分鉴定方面。目前，对机体摄入花                             人宫颈癌细胞，哈尔滨医科大学提供。
            色苷在胃肠道内消化稳定性的报道较少。因此，研                                 HZQ-F 全温振荡培养箱，哈尔滨市东联电子技
            究花色苷在胃肠道中的消化稳定性，对深入分析花                             术开发有限公司；UV-3200 扫描型紫外-可见分光光
            色苷在机体内的生物利用率有重要意义。                                 度计，上海美谱达仪器有限公司；PHS-550 雷磁 pH
                       [4]
                 Manach 等研究发现，在人体血浆中仅有质量                       计， 上海 仪电科 学 仪器有 限 公司； Milestone
                                                [5]
            分数 1%的花色苷被消化吸收。王月华 等研究发                            ETHOSA 微波消解/萃取系统，意大利 Labtech 仪器
            现，经胃肠消化后蓝靛果提取物总酚含量增加                               股份有限公司；DRYER 真空冷冻干燥器，德国
                                                   [6]
            48.2%，花色苷含量降低 67.6%。Vitaglione 等研究                 Siemens 公司；KH19A 台式高速高性能离心机，湖
            发现，原儿茶酸是人体摄入花色苷单体中矢车菊-3-                           南凯达科学仪器有限公司；Agilent1260 高效液相色
            葡糖苷的主要代谢物，占人类摄取花色苷总量的                              谱-布鲁克质谱联用仪，美国 Agilent 公司。
            73%。以上研究表明，消化稳定性是生物活性物质                            1.2    方法
            对机体功效的影响因素。虽然体外消化模型不同于                             1.2.1    蓝莓提取物制备
            人或动物模型，但体外消化模型研究活性成分的生                                 准确称取（2.00 g）蓝莓粉末，按照料液比（料
            物利用率更接近于在人或动物体内活性成分被生物                             为蓝莓粉末，单位 g；液为乙醇溶液，单位 mL）1∶
            体利用的情况；且该模型具有简单、快捷、成本低                             30 加入体积分数为 60%乙醇溶液充分混合，50  ℃
            和重演性好等优点。                                          下微波提取 5 min，真空抽滤得上清液，滤渣按上述
                 鉴于此，采用体外模拟人体胃肠消化的方法，                          方法重复提取 3 次至滤渣无色，合并 3 次抽滤所得
            考察了蓝莓提取物在消化前后总酚、总花色苷含量，                            的滤液，在 40  ℃下旋转蒸发将其浓缩，收集浓缩
            抗氧化能力和对 HepG2 肝癌细胞、A549 肺癌细胞                       液。用 500  mL 装有 HPD-700 大孔树脂的玻璃柱在
            和 Hela 人宫颈癌细胞生长抑制作用的变化，花色苷                         层析柜中对收集的浓缩液进行分离纯化 （纯化条
                                                                                                   [7]
            组成以及降解途径。以期为科学评价蓝莓的营养价                             件 ：上样 溶液 质量浓 度为 0.75  g/L、 上样流 速
            值和抗氧化活性提供理论依据。                                     0.5 mL/min、pH 2.0 和洗脱剂体积分数为 60%乙醇、
                                                               洗脱流速 1.5  mL/min），收集 HPD-700 大孔树脂纯
            1    实验部分
                                                               化后滤液，将其再次浓缩至无乙醇残留，将得到的
            1.1    材料与试剂                                       浓缩液冷冻干燥成粉末，得到蓝莓提取物，将粉末
                 蓝莓于 2017 年 7 月下旬，采摘于黑龙江省大兴                    密封于真空塑料袋中，置于20  ℃冰箱中避光保存，
            安岭地区。挑选成熟度均一的蓝莓进行打浆，然后                             备用。
            放在18  ℃冰箱中将其冷冻 24 h，再置于真空冷冻                       1.2.2    体外消化过程模拟
                                                                                            [8]
            干燥机中干燥 48 h，取出用粉碎机进行粉碎，过 40                            模拟体外消化过程参考 Ryu 等的方法并稍作
            目筛，制成果粉，避光，密封保存在 4  ℃冰箱中，                          改动。模拟分为两个阶段，第一阶段胃消化：称取
            备用。                                                （0.20 g）蓝莓提取物，加入 50 mL  质量分数为 0.9%
                 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2,2-联氮基-               NaCl 溶液将其溶解，用 1  mol/L  盐酸将溶液 pH 调
            双-（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）（ABTS）、2,3,5-三苯                   至 2.0（未消化样品溶液），随后加入（0.16 g）胃蛋
            基-2h-四唑氯化物（TPTZ）、水溶性 V E （Trolox），                 白酶，将混合液置于 37  ℃充满氮气的恒温振荡培
            美国 Sigma 公司；胃蛋白酶（活力 2.33 U/g）、胰蛋                   养箱中避光振荡 4  h（胃消化样品溶液）。第二阶段
            白酶（活力 10.01 U/g）和福林酚，北京鼎国生物实                       肠消化：向上述经胃消化得到的消化液中加入 0.5
            剂有限公司；醋酸、水杨酸、浓盐酸、氯化铁、冰                             mol/L NaHCO 3 ，将溶液 pH 调至 7.5，然后分别加入
            乙酸均为 AR，天津市富宇精细化工有限公司；甲酸、                          12 mL 2.0 g/L 胰蛋白酶液和 6 mL 12.0 g/L 胆酸盐，
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