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第 3 期 薛宏坤，等: 体外消化对蓝莓提取物抗氧化、抗癌及组分的影响 ·463·
同上述条件避光振荡 4 h。消化 4 h 后取出样品，用 1.2.5.2 DPPH 自由基清除能力
1.0 mol/L 盐酸将样品酸化至 pH 2.0，在 4 ℃下以 参照封燕 [12] 等方法并略作改动。将消化前后的
4000 r/min 将样品离心 15 min，取上清液，置于 4 ℃ 样品用体积分数 60%的乙醇配制成不同质量浓度的
冰箱中冷藏备用（肠消化样品溶液）。 溶液（0.10、0.20、0.40、0.60、0.70 和 0.80 g/L），
1.2.3 总酚含量测定 从中分别取出 2 mL 置于 10 mL 具塞比色管中，然
消化前、后蓝莓提取物中总酚含量测定参考 后分别加入 2.8 mL DPPH 溶液并将其混合，避光室
[9]
Koyu 等的方法并稍作改动。准确量取 100 mL 稀释 温下放置 30 min，在 517 nm 处分别测定其吸光值，
5 倍的样品溶液，然后加入 1.25 mL 福林酚试剂，将 以同样的方法测定相同浓度 V C 对 DPPH 自由基清除
其充分搅拌混合，25 ℃避光反应 4 h，加入 1.0 mL 能力，按照式（3）计算 DPPH 的清除率。IC 50 值为
饱和 Na 2 CO 3 溶液，避光 2 h，在 760 nm 处测定其 在 517 nm 处，DPPH 自由基清除率达到 50%时所需
吸光度。以没食子酸（GAE）标样质量浓度为横坐 的样品浓度。
标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得方程为： DPPH自由基清除率 / % (A c A s ) / A c 100 （3）
2
y=4.8106x+0.0735（R =0.9997），GAE 在 10~250 mg/L 1.2.5.3 ABTS 自由基清除能力
+
+
内有良好的线性关系，结果以每升样品溶液含有的 参照李楠 [13] 等的方法并稍作修改。ABTS 储备
GAE 质量表示（mg GAE/L）。 液的制备：5 mL ABTS（7 mmol/L）与 88 μL 过硫
1.2.4 花色苷含量测定 酸钾（140 mmol/L）充分混合避光 12 h。将消化前
采用 pH 示差法测定消化前后样品总花色苷含 后样品溶液用体积分数为 60%的乙醇配制成不同质
量，参考于泽源 [10] 等的方法并略做改动。取 1 mL 量浓度 的溶 液（ 7.50 、 15.00 、 30.00 、 60.00 和
样品溶液，分别加入 9 mL pH 1.0 氯化钾缓冲液和 120.00 mg/L），从中分别取出 0.4 mL 置于 10 mL 具
+
9 mL pH 4.5 乙酸钠缓冲液，将其充分混合，避光 1 h， 塞比色管中，然后加入 4 mL ABTS 工作液并将其充
分别在 520 和 700 nm 处测定其吸光值，总花色苷含 分混合，避光室温下放置 10 min，在 734 nm 处分别
量（c）用每升样品溶液中含有矢车菊-3-葡萄糖苷 测定其吸光值。以相同浓度 V C 作对照，按照式（4）
+
（Cyd-3-G）的质量表示（mg Cyd-3-G/L），其表达 计算 ABTS ·的清除率，IC 50 值为在 734 nm 处，
+
式如式（1）所示。 ABTS 自由基清除率达到 50%时的样品浓度。
520 A pH 520 A pH 4.5 449.2 1000 ABTS 自由基清除率 / % A （ A / A ） 100 （4）
+
A
A
c 700 1.0 700 f c s c
26900 l 1.2.6 MTT 测定
（1） 将消化前后的样品参照郭孝萱 [14] 等的方法溶解
式中：c 为总花色苷含量，mg Cyd-3-G/L；A 520 和 于 DMEM 培养基中，将其配制成质量浓度为 1.0 g/L
A 700 分别为样品在 520 和 700 nm 处的吸光值；f 为 的溶液，溶液过 0.22 μm 滤膜，经除菌置于20 ℃
稀释倍数；449.2 为矢车菊素-3-葡萄糖苷的相对分 冰箱中保存。HepG2 肝癌细胞、A549 肺癌细胞和
子质量；26900 为矢车菊素-3-葡萄糖苷的消光系数； Hela 人宫颈癌细胞均培养于含有质量分数 10.0%胎
l 为比色皿光程，cm。 牛血清，质量分数 1.0%青霉素/链霉素的 DMEM 培
1.2.5 消化前后蓝莓提取物抗氧化能力测定 养基中，将其置于 37 ℃，含体积分数 5% CO 2 及
1.2.5.1 抗脂质过氧化能力 90%湿度的培养箱中常规培养。将处于对数生长期
参照李颖畅 [11] 等的方法并略作改动。将消化前 的 HepG2 肝癌细胞、A549 肺癌细胞和 Hela 人宫颈
4
后的样品用体积分数为 60%乙醇配制成不同质量浓 癌细胞按 8×10 个/mL 的密度分别接种于 96 孔培养
度的溶液（0.25、0.50、0.75、1.00、1.25 和 1.50 g/L）， 板，贴壁培养 24 h。弃去上清，然后用 PBS 清洗 3
分别取 1 mL，然后分别加入 1 mL LLS 溶液、1 mL 次，准确移取 100 μL 样品加入到每个孔中，继续培
0.4 mol/L 的 FeSO 4 溶液，充分混合。避光 37 ℃水 养 24 h，加入 1.0 g/L MTT 的无血清 DMEM 培养液
浴 1 h，加入 2 mL TCA-TBA-HCl（15 g TCA，0.37 g 100 μL，静止 4 h 后弃上清，最后加入 DMSO，置
TBA，2.1 mL 浓盐酸）混合液，避光水浴 15 min， 摇床低速振 5 min，490 nm 处测定吸光度。细胞存
以 3000 r/min 离心 10 min，取上清液在 535 nm 处测 活率按照式（5）计算。
定其吸光值。按式（2）计算脂质体抑制率，IC 50 值为 细胞存活率 /% A / A 100 （5）
s c
在 535 nm 处，抑制率达到 50%时所需的样品浓度。 1.2.7 HPLC-ESI-MS 法对消化前后样品花色苷组
脂质体抑制率 /% A （ A / A ） 100 （2） 分测定
c s c
式中：A s 为样品的吸光值；A C 为以 1 mL V C 溶液代 未消化样品：经纯化后的蓝莓粉末（0.20 g），
用质量分数 1%盐酸-甲醇溶液溶解，将其配制成
替 1 mL 样品溶液，操作同上，测得空白管的吸光值。
