Page 124 - 201904
P. 124

·650·                             精细化工   FINE CHEMICALS                                  第 36 卷

                 Scientific  Research  in  the  Public  Welfare  (20140470102);  Heilongjiang  Province  Postdoctoral  Scientific
                 Research Foundation (LBHQ15009 and LBHZ15006)


                 向日葵（Helianthus annuus  L.）为菊科向日葵              琼脂，北京奥博星生物技术有限责任公司；考马斯
            属植物，种仁可供食用，种皮、花盘及茎秆可作饲                             亮蓝试剂盒、碱性磷酸酶（AKP）测试盒，南京建
            料及工业原料       [1-2] 。向日葵具有很高的药用价值，全                 成生物工程研究所；DAPI（4,6-二脒基-2-苯基吲哚）
            株均可入药，其中向日葵茎髓（茎秆髓芯）具有清                             溶液，北京索莱宝生物科技有限公司；氮蓝四唑
                                 [3]
            热、利尿、止咳的功效 。茎秆作为向日葵产业的                             （TTC），上海蓝季科技发展有限公司；其他试剂均
            主要副产物年产量巨大，但多作为烧柴或废弃物，                             为分析纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。
            既浪费资源又污染环境。                                            营养琼脂培养基（蛋白胨 10 g/L、牛肉粉 3 g/L、
                 世界卫生组织（WHO）认为抑菌剂耐药性是人                         氯化钠 5 g/L、琼脂 15 g/L，pH=7.20.2），营养肉汤
            类健康的重大威胁之一，其全球行动纲领中亦将优                             培养基（蛋白胨 10 g/L、牛肉粉 3 g/L、氯化钠 5 g/L，
                                          [4]
            化和研发新抑菌剂列为主要内容 。天然产物在传                             pH=7.20.2），121  ℃高压灭菌 15 min，用于后续抑
                                                     [5]
            染性疾病等领域的药物开发中具有重要作用 ，而                             菌实验。
            植物源抑菌剂具有相对安全性高、多作用靶点、不                                 752N 紫外-可见分光光度计，上海精科实业有
            易产生耐药性等优点，可作为常用抗生素的替代品                             限公司；Infinite  200 全波长酶标仪，瑞士 Tecan 公
            而日益受到人们的关注           [6-7] 。研究表明，在一些植物             司；JSM-7500F 扫描电镜，日本电子株式会社；
            次生代谢产物中，酚类和黄酮类成分具有较好的抑                             DM4000B 荧光正置显微镜，德国 Leica 公司；F-7000
            菌活性    [8-10] 。迄今为止，国内外学者已从向日葵苗                    荧光分光光度计，日本 Hitachi 公司；DDS-307A 电
            及叶片中分离出多种抑菌性成分                [11-12] ，但向日葵茎       导率仪，上海精密科学仪器有限公司；HPS-160 生
            髓提取物是否具有抑菌活性尚不明晰。在前期工作                             化培养箱，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司。
            中，作者对向日葵茎髓乙醇提取物不同极性萃取部                             1.2    方法
            位总酚和总黄酮含量、体外抗氧化活性及其相关性                             1.2.1    向日葵茎髓不同极性提取物的制备
            进行了研究      [13] 。文献显示，多种酚类和黄酮类化合                       依据文献[13]，首先制备向日葵茎髓乙醇提取
                                        [4]
            物兼具抗氧化和抑菌双重作用 。因此，本文拟进                             物，再用适量去离子水充分混悬后依次用石油醚、
            一步对向日葵茎髓提取物的抑菌活性及其可能的作                             乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，分别
            用机制进行探讨。                                           得到向日葵茎髓石油醚部位（PE，灰白色粉体）、
                 本文选取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽                          乙酸乙酯部位（EE，黄色粉体）和正丁醇部位（BE，
            孢杆菌和黏质沙雷氏菌 4 种受试菌株，探究了向日                           褐色膏状物），20  ℃保存备用。
            葵茎髓不同极性萃取物对受试菌的抑菌活性，在此                                 样品液配制：称取 PE、EE 和 BE，分别用适量
            基础上选取抑菌作用较好的乙酸乙酯部位，以金黄                             DMSO 溶解配制成质量浓度为 200 g/L 的样品（母）
            色葡萄球菌和大肠杆菌为研究对象，分别从细胞壁                             液用于抑菌实验。
            和细胞膜结构完整性、蛋白和酶及遗传物质等内容                             1.2.2    抑菌活性
            物泄露方面对抑菌机制进行研究，以期为向日葵的                                 采用琼脂扩散法测定各萃取部位抑菌圈直径
            进一步应用研究提供依据。                                       （IZD）  [14] 。将适量测试菌株分别接种于营养琼脂
                                                               培养基中，振摇培养 16~24 h（37  ℃，100 r/min）。
            1   实验部分
                                                               将生长良好的不同受试菌接种于营养肉汤培养基
            1.1    试剂与仪器                                       中，振摇培养 16~18 h（37  ℃，120 r/min），培养至
                                                                               9
                                                                                       11
                 向日葵茎秆植物材料于 2015 年秋季采集于黑                       菌落浓度为 1.010 ~1.010 CFU/L，再将 4 种菌悬
            龙江省哈尔滨市，由东北林业大学森林植物生态学                             液 用 血 球计数 板法 配制成 菌落 浓度为 1.010               9
            教育部重点实验室鉴定为菊科植物向日葵（Helianthus                      CFU/L 的菌悬液，备用。在培养皿中倒入琼脂粉含
            annuus L.）的干燥茎。                                    量 2%的培养基 10 mL（由 2 g 琼脂粉加 100 mL 蒸
                 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大              馏水配制）作为底层，待凝固后在其上等距离分散
            肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus              垂直摆放 5 个无菌牛津杯（内径 6 mm、外径 8 mm、
            subtilis）和黏质沙雷氏菌（Serratia marcescens）由             高 10 mm），将 0.2 mL 菌悬液分别加入到 15 mL 营
            东北林业大学生命科学学院惠赠。蛋白胨、牛肉粉、                            养肉汤培养基中后再倒入培养皿中，待凝固后向牛
   119   120   121   122   123   124   125   126   127   128   129