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第 4 期 陈小强，等: 向日葵茎髓提取物的抑菌活性及机制 ·655·

在 60~120 min 内，胞外可溶性蛋白含量继续上升 的通透性，还能进一步破坏膜的完整性，使细胞内
（>0.5 g/L）；150~240 min 内，胞外可溶性蛋白含 的蛋白等大分子物质外泄，从而导致菌悬液中的可
量无明显变化。经 EE 处理大肠杆菌胞外可溶性蛋 溶性蛋白含量上升。
白的含量测定结果见图 4b，在加入 EE 后 30 min， 2.6 EE 对菌悬液 DNA 的影响
胞外可溶性蛋白含量达到 0.4 g/L；在 60~150 min 内， 为验证 EE 对实验菌细胞膜通透性的影响，对
蛋白含量近乎平稳；在 180 min 时，蛋白质质量浓 加入 EE 后菌悬液的 DNA 含量进行了 DAPI 染色观
度下降至 0.3 g/L，可能是因为菌体的自我修复机制 测（图 5 和图 6）。由图 5 可见，金黄色葡萄球菌
及其累积效应，使该时段蛋白质质量浓度呈现短暂 和大肠杆菌的 EE 处理组，均较其对照组的荧光强
下降；但随后在 210 min 时胞外蛋白含量再次上升 度有不同程度减弱。
并呈稳定状态。

a—金黄色葡萄球菌，对照；b—金黄色葡萄球菌，EE 处理；c—
大肠杆菌，对照；d—大肠杆菌，EE 处理

图 5 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的荧光谱图
Fig. 5 Fluorescence images of S. aureus and E. coli

图 4 EE 对金黄色葡萄球菌（a）和大肠杆菌（b）可溶
性蛋白质量浓度的影响
Fig. 4 Effects of EE on the mass concentration of soluble
protein of S. aureus (a) and E. coli (b)

蛋白质是生命活动的物质基础，是与各种形式
的生命活动紧密联系的基本有机物 [36] 。一旦蛋白质
出现异常，细胞便无法进行正常的生长繁殖。在抑
菌活性评价中，若受试物对菌体细胞膜产生破坏作
用，将造成其胞内蛋白质外泄，故可通过检测胞外
蛋白质含量来说明受试物是否通过破坏细胞膜结构
而具有杀伤细菌作用。可溶性蛋白是细菌重要的渗
透调节物质，其增加和积累可提高细胞的保水能力，
对细胞生命物质及细胞膜起到保护作用 [37] 。李昌勤
等曾用此方法测定经隐丹参酮作用后金黄色葡萄球

菌胞外可溶性蛋白的含量，发现可溶性蛋白含量高
于空白对照组 [38] 。由图 4 可见，EE 处理使金黄色葡 图 6 EE 对金黄色葡萄球菌（a）和大肠杆菌（b）菌悬
液荧光强度的影响
萄球菌和大肠杆菌悬液的胞外可溶性蛋白含量较对 Fig. 6 Effects of EE on fluorescence intensity of S. aureus
照组增加，说明 EE 不仅能增加两种实验菌细胞膜 (a) and E. coli (b)