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第 4 期                     赵九阳，等:  六氢-酸/甲基--环糊精包合物的抑菌活性                                 ·697·


                         [3]
            张和氧化应激 ；对羟基苯甲酸酯可能会影响人体                             药品检验所；金黄色葡萄球菌（26001）、大肠杆菌
            的雌激素水平       [4-6] 。因此，寻找无毒无害的天然防腐                 （44825），乌鲁木齐市疾病预防控制中心。
            剂成为当前科研工作者研究的热点。                                       UV-5300PC 型紫外-可见分光光度计，上海元析
                 六氢-酸（HBA）是啤酒花中-酸氢化还原的                       仪器有限公司；WGZ-XT 细菌浊度仪，杭州奇威仪
                                                     [7]
            产物，它不但具有比-酸更强的广谱抑菌性 ，且                            器有限公司；洁净工作台，上海博迅医疗生物仪器
                                          [9]
                             [8]
            具有很好的稳定性 以及抗氧化 、抗炎                    [10] 、抗肿     股份有限公司；DHP-420 型电热恒温培养箱，北京
            瘤 [11] 等生理活性。然而，HBA 在水基体系中溶解度                      市永光明医疗仪器厂；高压灭菌锅，山东省淄博新
            差，极大地限制了其应用领域。环糊精（CD）是一                            华仪表厂；BS210S 型电子天平，德国赛多利斯公司。
            类性能良好的包合基材料，因为具有“外亲水、内                             1.2    方法
            疏水”的特性，可以和多种客体分子进行包合，从                             1.2.1    HBA/M- -CD 包合物的制备
            而改善客体分子的某些性质，如增加水溶性、降低                                 根据文献[19]的方法，准确称取 10.00 mg HBA
            毒性、缓释等       [12-15] 。因此，利用环糊精分子与客体                和 500.00 mg M--CD 置于瓷坩埚中，于 30 ℃研磨
            分子包合而提高客体分子的水溶性这一特点                      [16] ，将   1.5 h，加入约 60 mL 蒸馏水溶解，然后以 8000 r/min
            HBA 与环糊精进行包合，可明显改善 HBA 的水                          离心 20  min，取上清液在 50 ℃的烘箱中干燥至恒
            溶性。                                                重，制得白色粉末状 HBA/M--CD 包合物。
                 金属离子广泛存在于各种水基食品体系中，天                              HBA 标准曲线的制备：准确称取 10.00  mg 的
            然来源的 HBA 分子中酚羟基基团活性很强，常见金                          HBA 溶解于甲醇，用 100  mL 的容量瓶定容，得到
            属离子是否会与其作用进而影响其抑菌活性是判断                             质量浓度为 0.10  g/L 的母液。分别准确移取 0.20、
            其应用前景的重要因素之一。本课题组前期工作中                             0.50、1.00、1.50、2.00、2.50  mL 该母液于 10  mL
            比较了 HBA 与多种环糊精包合后的水溶性、稳定性                          容量瓶中，用甲醇定容，混匀，分别得到浓度为 2.00、
            等。本文制备了 HBA 甲基--环糊精（M--CD），                      5.00、10.00、15.00、20.00、25.00 mg/L 的 HBA 系
                                                               列标准溶液。使用甲醇调零，标准溶液进行全波长
            在比较其对食品中常见的革兰氏阳性菌和阴性菌的
                                                               （190~800 nm）扫描，得到最大吸收波长为 350 nm。
            抑菌活性差异的基础上，以抑制作用最强的菌种为
                                                               以 350 nm 处测得的吸光值（A）为纵坐标，标准液
            参照，考察了几种金属离子、食品添加剂中的还原
                                                               质量浓度（，mg/L）为横坐标，绘制 HBA 标准曲
            剂、氧化剂、防腐剂等对其抑菌活性的影响，以期
                                                               线为 A=  0.0524ρ+0.0014，线性范围 0~25  mg/L，
            为 HBA 在水基食品体系中的应用奠定了理论基础。
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                                                               R =0.9977。
            1    实验部分                                              将制得的包合物称取 10 mg 并溶于甲醇中，在
                                                               350 nm 波长下测定吸光度值，根据上述标准曲线计
            1.1    试剂与仪器                                       算包合物中 HBA 的质量分数为 2.22%。
                 HBA（熔点 135.1~135.5 ℃，HPLC 测定纯度大               1.2.2    菌悬液的制备
            于 99%），自制     [18] ； M--  CD，山东智源生物科技                 将菌体接种于营养肉汤中，扩大培养至对数期，
            公司；营养肉汤，北京奥博星生物技术有限责任公                             然后将上述菌体接种于 LB 固体培养基中，37 ℃恒
            司；氯化钠、氯化亚铁、过氧化氢（质量分数为 30%）、                        温培养 24  h 后，用浊度仪配制浓度为（1~10）×
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            氯化铜、硫酸镁、无水氯化钙、苯甲酸钠、亚硝酸                             10  CFU/mL 的菌悬液，备用。
            钠、甲醇、高锰酸钾、氯化锌、氯化钾等，均为市                             1.2.3    HBA/M--CD 包合物最小抑菌浓度（MIC）
            售分析纯；注射用青霉素〔160 万国际单位（U），                                的测定
            批号：F7092302〕，华北制药股份有限公司；阿莫西                            采用滤纸片法       [20] 和二倍稀释法    [21] 测定其最小
            林胶囊（批号：02171102），北京悦康凯悦制药有限                        抑菌浓度（MIC）。利用二倍稀释法分别配制质量浓
            公司。                                                度为 130.00、65.00、32.50、16.25、8.12、4.06 mg/L
                 LB 固体培养基：琼脂粉 10 g/L，蛋白胨 10 g/L，               的 HBA/M--CD 包合物溶液。将 5.50  μL 的包合物
            酵母浸粉 5 g/L，NaCl 10 g/L，pH=7.2~7.4，121 ℃            溶液滴于滤纸片中，充分吸收后间隔适当距离贴于
            高压灭菌 20 min，用于后续抑菌实验。                              培养基中。以同样质量浓度的 HBA 甲醇溶液和山梨
                 单核增生性李斯特菌（ATCC  19115）、白色念                    酸钾、青霉素、阿莫西林的水溶液（按照上述包合
            珠菌（CMCC  98001）、乙型溶血性链球菌（CMCC                      物质量浓度梯度并增加了 520.00、260.00 mg/L 两个
            32210）、乙型副伤寒沙门氏菌（CMCC 50094）、阪                     质量浓度），以及体积分数为 75%的酒精作为阳性对
            崎肠杆菌（ATCC  29544），新疆维吾尔自治区食品                       照，无菌水作为阴性对照。37  ℃恒温培养 24 h 后，
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