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第 36 卷第 5 期 精 细 化 工 Vol.36, No.5
201 9 年 5 月 FINE CHEMICALS May 2019

生物工程
优化ú型胶原蛋白的纯化工艺

1
2*
刘雯恩 ，周艳芳 3,4 ，范志强 1,3,4 ，李玉玲 1,3,4 ，甘 兵 ，彭新生 1,3,4*
（1. 广东医科大学 药学院，广东 东莞 523808；2. 广东医科大学 第三附属医院，广东 佛山 528000；3. 生
物医药产业化协同创新中心，广东 东莞 523808；4. 广东医科大学 海洋医药研究院，广东 湛江 524023）

摘要：使用 0.5 mol/L 乙酸和胃蛋白酶提取Ⅰ型胶原蛋白后，结合等电点沉淀法和超滤纯化技术对Ⅰ型胶原蛋白
进行纯化。通过鞣酸沉淀法和聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）证实等电点沉淀可有效除去胃蛋白酶；经超滤
纯化后的胶原蛋白紫外光谱检测在 235 nm 处有最大吸收峰；在 SDS-PAGE 谱图上出现 3 条Ⅰ型胶原蛋白特征
谱带；采用凯氏定氮法也证实其纯度符合 YY/T 1511—2017 医药行业标准；通过傅里叶变换红外光谱、圆二色
谱法（Circular Dichroism, CD）测定证实胶原蛋白三螺旋结构被完整保留下来。采用等电点沉淀法结合超滤纯化
技术，可保证Ⅰ型胶原蛋白的高纯度及三螺旋结构的完整性。
关键词：Ⅰ型胶原蛋白；等电点沉淀法；超滤纯化；圆二色谱法；生物工程
中图分类号：R945 文献标识码：A 文章编号：1003-5214 (2019) 05-0850-07

Optimization of Purification Process of Collagen Type Ⅰ

3,4
1
LIU Wen-en , ZHOU Yan-fang , FAN Zhi-qiang 1,3,4 , LI Yu-ling 1,3,4 ,
2*
GAN Bing , PENG Xin-sheng 1,3,4*
（1. School of Pharmacy, Guangdong Medical University, Dongguan 523808, Guangdong, China; 2. The Third
Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Foshan 528000, Guangdong, China; 3. Biomedical Innovation
Center, Guangdong Medical University, Dongguan 523808, Guangdong, China; 4. Marine Biomedical Research
Institute, Guangdong Medical University, Zhanjiang 524023, Guangdong, China）

Abstract: Isoelectric point precipitation method and ultra-filtration purification technique were used to
purify the collagen type Ⅰ extracted from bovine tendon in 0.5 mol/L acetic acid and pepsin solution at
low temperature. Tannic acid precipitation and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis
(SDS-PAGE) demonstrated that isoelectric precipitation could effectively remove pepsin. The purified
collagen type Ⅰ had a maximum absorption peak at 235 nm. SDS-PAGE diagram showed three
characteristic bands of collagen type Ⅰ. The Kjeldahl method also confirmed that the collagen purity met
YY/T 1511- 2017 pharmaceutical industry standard. FTIR and circular dichroism spectra revealed that the
triple helix structure of collagen was completely preserved. The results showed that isoelectric precipitation
method combined with ultra-filtration purification technique can ensure collagen type Ⅰ has high purity
and its integrity of the triple helical structure.
Key words: collagen type Ⅰ; isoelectric precipitation method; ultra-filtration purification; circular dichroism;
biological engineering
Foundation items: Science and Technology Planning Project of Guangdong Province of China
(2015A020214020); Science and Technology Planning Project of Dongguan, China (2017507152431)

[1]
Ⅰ型胶原蛋白主要存在于动物的骨、真皮组织、 类具有三螺旋结构的蛋白质 ，其具有良好的凝胶
[2]
肌腱、韧带、角膜中，是动物体内含量最丰富的一 性 、生物相容性、低抗原性、信号传导性、生物

收稿日期：2018-10-12; 定用日期：2019-02-12; DOI: 10.13550/j.jxhg.20180754
基金项目：广东省科技计划项目（2015A020214020）；东莞市科技计划项目（2017507152431）
作者简介：刘雯恩（1994—），女，硕士生，E-mail：441970152@qq.com。联系人：甘 兵（1971—），男，硕士，主任医师，E-mail：
gbhlm@126.com；彭新生（1977—），男，教授，E-mail：gdmcpxs@163.com。