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·854· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 36 卷

Ⅰ型胶原蛋白的结构保存较完整，亦证实不存在其
他小分子蛋白类物质，与标准的Ⅰ型胶原蛋白相比，
条带一致，纯度较高。

1—超滤纯化后的胶原蛋白溶液；2、3、4—超滤纯化前的胶原
蛋白溶液
图 5 胶原蛋白溶液超滤纯化前后的 SDS-PAGE 图
Fig. 5 SDS-PAGE diagram of collagen type Ⅰ before
and after ultra-filtration purification

1—蛋白标准相对分子质量；2—Ⅰ型胶原蛋白（自制）；3—Ⅰ
型胶原蛋白（标样）
图 7 Ⅰ型胶原蛋白 SDS-PAGE 图
Fig. 7 SDS-PAGE map of collagen type Ⅰ

2.3.2 傅里叶变换红外光谱
在红外光谱图中，胶原蛋白特有的三螺旋结构
及其分子上特有的氨基和亚氨基结构主要表现为 4
1
个特征吸收峰 ，即 3299~3330 cm 处的酰胺 A 带，
1
1
2877~3084 cm 处的酰胺 B 带，1661~1636 cm 处

1
的酰胺Ⅰ带和 1560~1540 cm 处的酰胺Ⅱ带。不同
图 6 Ⅰ型胶原蛋白的紫外吸收光谱
胶原蛋白的红外光谱见图 8。
Fig. 6 Ultraviolet absorption spectra of collagen type Ⅰ

表 3 凯氏定氮法测定干燥后的胶原蛋白中蛋白含量
Table 3 Kjeldahl protein determination of collagen
Nitrogen content Non-protein Mass
in samples after nitrogen digested percentage of
Sample protein nitrogen sample total protein in
digestion nitrogen content
(A 1)/(mg/mg) (A 2)/(mg/mg) the sample/%
1 0.1719 0.0012 94.77
2 0.1727 0.0020 94.70
3 0.1689 0.0003 93.57

a—Ⅰ型胶原蛋白（自制）；b—Ⅰ型胶原蛋白（标样）
2.3 ú型胶原蛋白结构分析
图 8 不同胶原蛋白的红外光谱
2.3.1 SDS-PAGE 法 Fig. 8 FTIR spectra of different collagen samples
Ⅰ型胶原蛋白的结构呈三股螺旋结构，由 3 条
肽链组成，相对分子质量约为 300 kDa，从动物肌 图 8 中，自制的胶原蛋白与Ⅰ型胶原蛋白（标
样）的峰形保持一致，胶原蛋白红外谱图中在 3318.89
腱中提取的Ⅰ型胶原蛋白含 2 条 α 1 肽链和 1 条 α 2
1
肽链。纯化后的Ⅰ型胶原蛋白 SDS-PAGE 图谱见图 cm 附近是 N—H 的伸缩振动吸收峰，1650.76 cm 1
7。由图 7 可知，相对分子质量为 130 kDa 处有两条 附近是酰胺Ⅰ带的 C==O 伸缩振动吸收峰，1558.20
谱带，一条谱带是由于两条 α 1 肽链重合所得，另一 cm 1 附近是酰胺Ⅱ带的 N—H 弯曲振动吸收峰。
1
条谱带表示单条的 α 2 肽链；图谱中在相对分子质量 1450 和 1230 cm 附近吸收峰比值大于 0.5，表示胶
为 250 kDa 处也有一条谱带，对应于胶原结构中的 原蛋白三螺旋结构的完整性。图 8 中自制胶原蛋白
1
链，链是肽链的二聚体，位于 250 kDa 上方的是 在 1455.99 和 1238.08 cm 处峰强度的比值为 1.12，
肽链的三聚体链 [18] 。电泳图上没有其他条带，表示 是胶原蛋白的特征值。由此可知，本实验检测的物