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第 6 期                    席高磊，等: 4-甲基-7-羟基香豆素及其衍生物的抗氧化性能                                 ·1161·


            以，通过检测 DNA 氧化反应过程中产生 TBARS 的                           抑制 GS•引发 DNA 氧化反应体系，按照文献已
            量，可以判断 DNA 氧化反应的程度。加入待测化合                          报道的方法      [19]  配制 pH=7.0 的磷酸 盐缓冲溶液
            物后，通过检测 DNA 氧化反应过程中产生 TBARS                        (PBS 2 ：3.9 mmol/L NaH 2 PO 4 、6.1 mmol/L Na 2 HPO 4 )、
            量的变化即可评估化合物的抗氧化性能                   [16] 。         2.24 g/L 的 DNA 溶液（PBS 2 ）、90.0 mmol/L 的 GSH
                                                               溶液（PBS 2 ）、75.0 mmol/L 的 CuSO 4 溶液（PBS 2 ）、
                                                               30.0 mmol/L 的 EDTA 溶液（PBS 2 ）、TBA 溶液（1.0 g
                                                               TBA、0.4 g NaOH、100 mL PBS 2 ），其他溶液配制
                                                               参见 1.3.1 节。分别取 13.4  mL  DNA 溶液、1.0  mL
                                                               CuSO 4 溶液及 0.5  mL  GSH 溶液置于 50  mL 锥形瓶
                                                               中，再加入 0.1 mL 待测化合物储备液，使待测化合
                                                               物终浓度为 200  mol/L。充分混匀后取 2  mL 加入
                                                               到试管，放入 37  ℃恒温水浴槽中，1.5 h 后取出，
                                                               冷至室温，依次加入 1.0 mL EDTA 溶液、1.0 mL TBA
                                                               溶液和 1.0  mL  TCA 溶液，振荡混匀后，在 100  ℃
            1.3.1    抑制 AAPH 引发的 DNA 氧化反应体系                    水浴中加热 30 min，速冷却至室温，加入 1.5 mL 正
                 按照文献已报道的方法          [17] ，首先配制 pH = 7.4       丁醇充分振荡萃取 TBARS，离心分层后，测定正丁
            的磷 酸盐缓冲溶液（PBS 1 ： EDTA  10  μmol/L，                醇层在 535 nm 波长处的吸光度值。
            NaH 2 PO 4   1.9  mmol/L ， Na 2 HPO 4  8.1  mmol/L ）、
                                                               1.4   捕获自由基性能研究
            2.24 g/L 的 DNA 溶液（PBS 1 ）、400 mmol/L 的 AAPH            化合物淬灭自由基活性检测中常用的自由基包
            溶液（PBS 1 ）、15~60 mmol/L 的目标化合物储备液                  括：碳自由基、氮自由基和氧自由基。本文采用室
            （DMSO 为溶液）、TBA 溶液（1.0  g  TBA，0.4  g               温下稳定的氮自由基和氧自由基（ABTS+•、DPPH•
            NaOH，100 mL  PBS 1 ）及质量分数 3.0%的 TCA 水
                                                               和 galvinoxyl 自由基），结构如下所示。ABTS+•为
            溶液。取 13.4 mL DNA 溶液和 1.5 mL AAPH 溶液加               N-中心自由基，可以与各种酚羟基发生氧化反应，
            入 50  mL 锥形瓶中，再加入 0.1  mL 待测化合物的                   其检测目的在于测试酚羟基还原自由基的能力。
            DMSO 溶液，分别配得 100、200、300 和 400 μmol/L              DPPH•也是一个 N-中心自由基，检测抗氧化剂将自
            的目标化合物混合液，充分混匀后分装入 7 只试管                           身的氢原子给予 N-中心自由基的能力，亦可检测抗
            中，每只 2  mL，此为 1 组，共计 3 组，总数为 21                    氧化剂中单电子给予 N-中心自由基的能力。同样，
            只试管，同时放入 37 ℃恒温水浴槽中。之后，每隔                          galvinoxyl 自由基是一个 O-中心自由基，与 DPPH•
            2 h 取出 1 组，速冷至室温，依次加入 1.0 mL TBA                   一样，可以检测抗氧化剂将氢原子或电子给予 O-中
            溶液和 1.0  mL TCA 溶液，振荡混匀后，在 100  ℃                  心自由基的能力。
            水浴中加热 15 min，速冷至室温，加入 1.5 mL 正丁
            醇充分振荡萃取 TBARS，离心后，测定 535  nm 波
            长处正丁醇层的吸光度。
            1.3.2    抑制 HO•和 GS•引发的 DNA 氧化反应体系
                 抑制 HO•引发的 DNA 氧化反应体系，按照文
            献已报道的方法        [18] 配制 30.0  mmol/L 的 H 2 O 2 溶液
            （PBS 1 ）、120.0 mmol/L 的 TCHQ 溶液（DMSO），
            其他溶液配制参见 1.3.1 节。分别取 13.4  mL  DNA
            溶液、1.0 mL H 2 O 2 溶液及 0.5 mL TCHQ 溶液置于

            50 mL 锥形瓶中，再加入 0.1 mL 待测化合物储备液，
            使待测化合物终浓度为 400 mol/L。充分混匀后取                       1.4.1    捕获 ABTS+•性能研究
            2 mL 加入到试管，放入 37  ℃恒温水浴槽中。30 min                       化合物淬灭 ABTS+•的测试方法依据文献已报
            后取出，冷至室温，依次加入 1.0  mL  TBA 溶液和                     道方法进行     [20] ，根据情况略作修改。首先配制溶液：
            1.0 mL TCA 溶液，振荡混匀后，在 100  ℃水浴中加                   称取 5.0 mg ABTS 和 1.5 mg K 2 S 2 O 8 加入 2 mL 容量
            热 30 min，速冷至室温，加入 1.5 mL 正丁醇充分振                    瓶中，加蒸馏水定容后，在室温暗处放置 24  h，颜
            荡萃取 TBARS，离心分层后，测定正丁醇层在                            色变为深蓝。之后转移至 100 mL 容量瓶中，以无水
            535 nm 波长处的吸光度值。                                   乙醇定容，并在 30  ℃恒温水浴中放置 30  min，得
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