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第 6 期                    李   进，等:  原儿茶酸烷基酯在水包油乳液中的抗氧化行为                                 ·1175·


            1103。                                              光光度计在 200~800 nm 扫描确定最大吸收波长，以
                               [7]
                 经分析并与文献 数据对比，确认所得产物分                          PA 的质量浓度为横坐标，PA 最大吸收波长处的吸
            别为 PA-C 2 、PA-C 4 、PA-C 8 和 PA-C 12 。              光度为纵坐标绘制标准曲线。
            1.2.2    DPPH 自由基清除能力测定                                精密称取 PA-C 2  7.2 mg、PA-C 4  4.3 mg、PA-C 8
                 参考 Claudia  [7]  等 的方法 。称 取 6.6  mg           8.55 mg、PA-C 12  7.7 mg，同上步骤绘制标准曲线。
            （0.0167 mmol）DPPH，用甲醇定容至 100 mL，配                      分别称取过量的 PA、PA-C 2 、PA-C 4 、PA-C 8 、
            置成 150  μmol/L 的 DPPH 甲醇溶液。称取 7.5  mg              PA-C 12 于 5 个 5 mL 具塞试管中，加入适量甲醇，于
            （0.03  mmol）6-羟基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸                25 ℃下振荡 24 h，离心、过滤、稀释后测吸光度值，
            （Trolox），用甲醇定容到 100  mL（600  μmol/L），              代入标准曲线求得平衡溶解度。实验均重复 3 次，
            然后再稀释成浓度分别为 250、200、150、100 和                      结果取平均值。
            50 μmol/L 的溶液。分别取 0.5 mL Trolox 稀释液和               1.3    PA 及其烷基酯对水包油乳液的抗氧化效率的
            4.5 mL  DPPH 甲醇 溶液 混合 ，振 摇 ， 置 于 暗 处                   测定
            120 min 后，用甲醇做空白，在 515 nm 处测吸光度。                   1.3.1    乳液制备
            以 Trolox 试剂浓度为横坐标，吸光度为纵坐标建立                            根据文献[10]的方法，将 3 种食用油脂（菜籽
            标准曲线，曲线斜率记为 k 1 。取 PA 及其烷基酯样                       油、玉米油、大豆油）去除生育酚、磷脂等少量组
            品代替 Trolox 试剂，同上步骤，建立以样品浓度为                        分得到精炼油脂。将精炼油脂、0.04  mol/L 柠檬酸
            横坐标，吸光度为纵坐标的标准曲线，曲线斜率记                             盐缓冲溶液（pH = 3）和作为乳化剂的吐温 20（体
            为 k 2 。样品的 DPPH 自由基清除能力（ARA）以 Trolox               积分数分别为 1%、2%、3%和 4%）制成不同的乳
            当量（单位 mol Trolox/mol）表示，按下式计算 ARA：                 液。在均质之前向缓冲液（亲水性强的 PA 和 PA-C 2 ）
                             ARA = k 2 /k 1 。                  或油相（疏水性强的 PA-C 4 ，PA-C 8 和 PA-C 12 ）中加
                 ARA 越大，自由基清除能力越强。实验均重复                        入 0.004  mol/L  PA 及其烷基酯。将混合物用高速分
            3 次，结果取平均值。                                        散均质机均质 2 min。然后将乳液转移到连续搅拌的
            1.2.3    ABTS 自由基清除能力测定                            恒温池中，目视检查它们的稳定性，以 3~4  h 内没
                 依据文献[8]的方法。2  mL 7.4 mmol/L ABTS         +    有观察到相分离为准。
            自由基溶液与 2 mL 2.6 mmol/L 过硫酸钾溶液混合，                   1.3.2    抗氧化效率测定
            混合液在室温下避光静置 12 h，取 1 mL 溶液用甲醇                          采用 Schaal 烘箱法    [11] 。将上述所得乳液避光保
            稀释 50~52 倍，在 734  nm 处测定吸光度在 0.700 ±               存于 45 ℃烘箱中，每 24 h 漩涡混合 1 min 以维持乳
                             +
            0.02，得到 ABTS 自由基储备液。称取 0.0015  g                   液在整个反应时间内的物理完整性。在规定的时间
            （0.06 mmol）Trolox，用甲醇溶解定容到 10  mL                  取样测定其共轭二烯值（CD）和 p-茴香胺值(AV)。
            （600 μmol/L），然后配制成浓度分别为 300、150、                       CD 的测定参考 Costa     [12] 等的方法，将乳液漩涡
            100、50 和 25  μmol/L 的溶液。分别取 150  μL 不同             混合 1 min，取 50 μL 用乙醇稀释至 10 mL，于 234 nm
                                               +
            浓度的 Trolox 溶液加入 2850 μL ABTS 溶液混合，                 处测量其吸光度。按下式计算 CD 值：
            室温下避光放置 2 h，在 734 nm 处测定吸光度，根                                     CD = A 234  / (C × L)
            据 Trolox 浓度和反应后的吸光度作出标准曲线                          式中：A 234 为样品溶液在 234 nm 处的吸光度；L 为
                                      2
            （ y = 0.0011  x+0.6302， R =0.9991）。配制 0.05        比色皿厚度，cm；C 为样品溶液的质量浓度，×0.1
            g/LPA 及其烷基酯的乙醇溶液，按照上述方法测定，                         g/L。
                      +
            清除 ABTS 自由基的能力以每克样品相当于 Trolox                          AV 的测定参考文献[13]的方法，并稍作修改。
            的 μmol 数来表示（μmol Trolox /g），每个样品平行                 将乳液漩涡混合 1  min，取 3  mL，加入 5  mL 饱和
            测定 3 次，结果取平均值。                                     NaCl 溶液以促进相分离。混合物冷冻，然后慢慢解
            1.2.4    在甲醇中的平衡溶解度测定                              冻至室温并在 2500 r/min 下离心 5 min。离心后，取
                           [9]
                 参考王亚乐 等的方法，并稍加修改。精确称                          0.2 g 油相用正己烷稀释至 10 mL，以正己烷做空白，
            取 PA 4.2 mg（0.0273 mmol），置于 10 mL 容量瓶中，            测量样品在 350 nm 处的吸光度 A 1 ，然后将 5 mL 剩
            加适量甲醇溶解并定容至刻度，得到 0.42  g/L 储备                      余的溶液转移到 10 mL 试管中，并加入 1 mL p-茴香
            液。分别取 0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8 和 1.0 mL             胺冰醋酸溶液，漩涡混合 10 s 后静置 10 min，以 p-
            储备液置于 10 mL 容量瓶中，加适量甲醇稀释并定                         茴香胺正己烷溶液为空白，于 350  nm 处测吸光度
            容至刻度，得到 0.0042、0.0084、0.0126、0.0168、               A 2 。按下式计算 AV 值：
            0.0256、0.0336 和 0.042 g/L 的标准溶液，用紫外分                            AV = 25(1.2A 2 －A 1 )/m
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