Page 84 - 精细化工2019年第8期
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·1572·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                  第 36 卷

            大量报道     [2-5] 。但有关柠檬桉树脂有效成分的研究报                   六水合三氯化铁、铁氰化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢
            道较少。                                               二钾、无水乙醇、无水碳酸钠、七水合硫酸亚铁、
                 国内外对柠檬桉树脂的研究主要集中在抗肿瘤                          水杨酸、磷酸钠、钼酸铵、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、
                                          [8]
            活性与驱虫活性方面          [6-7] 。Shen 等 开展柠檬桉树脂           三氯甲烷、乙酸丁酯、30%（质量分数）过氧化氢，
            的抗肿瘤活性研究，结果表明，树脂水提物含有的                             AR，广东光华科技股份有限公司。
            高浓度酚类和黄酮类化合物是对人肝癌 HepG2 细胞                             UV-2550 型紫外-可见分光光度计，日本 Shimadzu
            有较强毒作用的原因。而黄酮类成分有多种生物活                             公司。
            性，在食品、保健品、医药和化妆品等领域得到广                             1.2    柠檬桉树脂的预处理
                   [9]
            泛应用 ，如抗癌        [10-11] 、抗菌 [12] 、抗病毒 [13] 等功能，        将采得的固体柠檬桉树脂除去树皮、树叶等大
            对人类的肿瘤       [14] 、机体衰老、心血管病        [15-16] ，骨质    块杂质，用研钵捣碎至粉末状，待用                 [26] 。
            疏松  [17] 、抗炎 [18] 、抗抑郁 [19] 、降低血糖 [20] 以及抗过敏       1.3    柠檬桉树脂总黄酮的提取
            [21]                                                   常温下，将捣碎后粉末状柠檬桉树脂用体积分
               等疾病的治疗有积极作用。黄酮通过抑制自由基
                                                               数 60%乙醇搅拌溶解，经抽滤、离心得到柠檬桉树
            产生、直接清除自由基、激活机体抗氧化的体系来                                                          [27]
            发挥抗氧化作用        [22] 。适量补充抗氧化剂可以在一定                 脂提取液，然后蒸发溶剂得固体                 ，获得柠檬桉树
                                                               脂总黄酮粗提物（A）。总黄酮含量最高可达 4.64%。
            程度上减缓机体内自由基引起的氧化损伤，有效预
                                                               1.4    柠檬桉树脂中总黄酮的显色反应
            防疾病的发生。余付香等            [23] 进行赶黄草黄酮的提取
                                                                   取 1 mL 柠檬桉树脂粗提液，加少量锌粉，再
            和纯化及其抗氧化研究，结果表明，乙酸乙酯纯化
                                                               加 1 mL 浓盐酸，置沸水浴中加热 2~3 min，观察颜
            的黄酮含量为 133.36 mg/g，对 1,1-二苯基-2-苦肼基
                                                               色变化；取 1 mL 粗提液，加入适量浓硫酸，振摇观
            自由基（DPPH·）、羟基自由基、超氧阴离子清除能
                                                               察其颜色变化；取 1 mL 粗提液，滴加 1%（质量分
            力和亚铁离子螯合能力的半数抑制浓度（IC 50 ）分
                                                               数）的三氯化铁溶液，观察颜色变化；取粗提液
            别为 0.076、0.209、0.038、0.593 mg/mL；蔡锦源等
                                                               5 mL，加 1%（质量分数）的 Al(NO 3 ) 3 溶液 5 mL，
            [24]
               用超声 - 微波协同提 取山豆根黄 酮，得率为                         在紫外灯下观察颜色变化           [28] 。
            10.38 mL/g,对 DPPH·、超氧阴离子和羟基自由基具                    1.5    柠檬桉树脂的薄层色谱测试
            有良好的清除作用，IC 50 分别为 9.52、17.21、                         配制不同的展开剂〔V（氯仿）∶V（乙酸乙酯）∶
            14.44 mg/mL；王沙沙等     [25] 采用不同大孔吸附树脂分              V（冰醋酸）=6.0∶4.0∶0.5〕置于层析缸中，用毛
            离纯化猪毛菜总黄酮，纯化后黄酮质量分数为                               细管吸取 10 μL 芦丁标准品溶液(0.05 g/L)、柠檬桉
            51.89%。对羟基自由基、超氧阴离子自由基清除率                          树脂总黄酮的粗提液分别点加到薄层板上。电吹风
            分别为 88.12%±6.05%和 45.94%±5.14%。而对柠檬                吹干后，放入层析缸中展开，溶剂展开至上边沿取
            桉树脂总黄酮溶剂提取纯化方法及其抗氧化活性方                             出吹干，用喷雾瓶将 1  g/L 三氯化铝溶液喷在薄层
            面的研究鲜见报道。                                          板上，吹干后在紫外灯下观察斑点移动的距离                     [29] 。
                 本文以柠檬桉树脂高效利用、利于工业化生产                          1.6    总黄酮定量分析的工作曲线
            为目的，首先进行柠檬桉树脂总黄酮的定性和定量                                 分别移取质量浓度为 0.05 g/L 的芦丁标准溶液
            分析，然后选用简单溶剂法提取纯化柠檬桉树脂总                             0.25、0.5、2.0、3.0、4.0 mL 于 10 mL 具塞试管中，
            黄酮，进而通过清除 DPPH·、总抗氧化性、还原能                          分别加入 5%（质量分数）AlCl 3 溶液 2 mL、1×10            4
                                                               mol/L 乙酸钠溶液 3 mL、60%（体积分数）乙醇溶
            力测试考察了树脂粗提物、总黄酮纯化物的抗氧化
                                                               液定容至刻度，摇匀，25 ℃恒温水浴中静置 30 min，
            活性，为综合利用柠檬桉资源、拓展柠檬桉树脂的
                                                               最大波长 418 nm 处测定吸光度值，以体积分数 60%
            应用领域提供了参考。
                                                               乙醇溶液作为空白，取 3 次平行实验的平均值。以
            1    实验部分                                          标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标
                                                               准曲线，根据标准曲线及公式计算总黄酮含量                     [30] 。
            1.1    试剂与仪器                                                           25  V
                                                                           W  /%          1    100    （1）
                 柠檬桉树脂（采于广西民族大学、广西南宁机                                             V   2  M   10 3
            电职业技术学院校园内），由广西大学林学院林学专                            式中：W 为柠檬桉树脂粗提液中总黄酮含量，%；25
            家赖家业教授鉴别；芦丁标准品（153-18-4），上海                        为容量瓶的体积，mL；ρ为由标准曲线计算得出的
            柏卡化学技术有限公司；  DPPH·，AR，美国 Sigma                     粗提液中总黄酮的质量浓度，g/L；V 1 为抽滤、过滤
            公司；三氯化铝、V C 、三水合乙酸钠、三氯乙酸、                          后粗提液的总体积，mL；V 2 为比色时所使用的粗提
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