Page 86 - 精细化工2019年第8期

·1574· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 36 卷

硝酸铝溶液，反应后，在紫外线照射下呈黄绿色荧 析法可分离杂质，选择性高，以标准样品作为对照
光。粗提液与芦丁标准品溶液的颜色变化一致，说 使结果更可靠。根据各成分对展开剂吸附能力的不
明粗提液中存在黄酮物质 [38] 。 同，利用文献[39]的方法对柠檬桉树脂中的总黄酮
进行分离。在最佳展开剂〔V（氯仿）∶V（乙酸乙
表 1 柠檬桉树脂粗提液中总黄酮的显色反应 酯）∶V（冰醋酸）=6.0∶4.0∶0.5〕下粗提液与芦
Table 1 Chromogenic reaction of total flavonoids from the
crude extract of Eucalyptus citriodira resin 丁标准品的薄层层析展开情况如图 1、表 2 所示。

编号 加入试剂类型 总黄酮粗提液 芦丁标品溶液
1 盐酸-锌粉 橙色 橙色
2 浓硫酸 红色 红色
3 三氯化铁 绿褐色 绿褐色
4 硝酸铝 黄绿色荧光 黄绿色荧光

2.1.2 柠檬桉树脂的薄层色谱分析 a—柠檬桉树脂粗提液；b—芦丁标准品
薄层层析（TLC）法在中药材的研究中主要用
图 1 粗提液（a）、芦丁标准品（b）的薄层层析结果
于化学成分的预实验、化学成分的鉴定等。薄层层 Fig. 1 TLC of the crude extract (a) and rutin (b)

表 2 柠檬桉树脂粗提液的薄层层析
Table 2 TLC analysis of the crude extract of Eucalyptus citriodira resin
展开剂 展开结果
V(氯仿)∶V(乙酸乙酯)=6∶4 8 个斑点（此硅胶板经水蒸气熏蒸）
V(氯仿)∶V(乙酸乙酯)∶V(冰醋酸)=6.0∶ 4.0∶ 0.25 出现 8 个斑点，有类似芦丁斑点，中间部分有 2 个斑点形成“念珠”，有拖尾现象
V(氯仿)∶V(乙酸乙酯)∶V(冰醋酸)=6.0∶ 4.0∶ 0.5 出现 8 个斑点，有类似芦丁斑点，中间有 3 个斑点形成“念珠”，分离较好
V(氯仿)∶V(乙酸乙酯)∶V(冰醋酸)=6.0∶ 4.0∶ 0.75 出现 8 个斑点，有类似芦丁斑点，中间有 2 个斑点形成“念珠”，有拖尾现象

由图 1、表 2 可知，以 V（氯仿）∶V（乙酸乙 由图 2 得到，总黄酮的线性回归方程为：
2
酯）∶V（冰醋酸）=6.0∶4.0∶0.5 为展开剂在薄层 y=25.11x+0.080，R =0.9998。说明在一定浓度范围
板上展开，254 nm 紫外灯下观察，粗提液薄层板（图 （0.0025~0.0400 g/L）内，吸光度与芦丁标准品浓
1a）出现 8 个斑点，念珠状拖尾分离较好，比移值 度之间具有较好的线性关系。
在 0.2~0.8，符合薄层层析要求。其中两个斑点与芦 2.3 总黄酮的纯化
丁标准品（图 1b）位置相近。证明柠檬桉树脂中存 溶剂萃取具有选择性高、分离效果好的优点。
在黄酮物质。
通常在常温或较低温度下进行,避免药材在高温、高
2.2 总黄酮定量分析方法的构建 [40]
压下失去活性 。粗提物（A）经不同溶剂先后两
将一系列浓度芦丁标准溶液经三氯化铝-乙酸
次超声萃取得到不同总黄酮含量的纯化物：先经氯
钠显色，25 ℃水浴中静置 30 min，在紫外分光光度 仿萃取，再用乙酸丁酯萃取得到纯化物 B；先经氯
计下测得相应的吸光度值 [29] 。以芦丁标准溶液的浓
仿萃取，再用二甲基甲酰胺萃取得到纯化物 C；先
度为横坐标，吸光度为纵坐标作图，结果如图 2 所示。
经二甲基甲酰胺萃取，再用氯仿萃取得到纯化物 D，
结果如表 3 所示。
由表 3 可知，产物 B 中总黄酮质量分数为
10.39%，约为 A 的 2.24 倍，产物 C 中总黄酮的质量
分数约为 A 的 3.89 倍，产物 D 中总黄酮质量分数约
为 A 的 9.52 倍。由倪晓蕾 [41] 的报道可知，二甲基
甲酰胺作为萃取剂，萃取 α-生育酚的效率高，说明
二甲基甲酰胺对酚类化合物的分离选择性好，而黄
酮类是最大的一类天然酚类物质。所以二甲基甲酰

胺作为先萃取溶剂能够提高萃取得到的总黄酮质量
图 2 芦丁标准曲线
Fig. 2 Standard curve of rutin 分数。