Page 96 - 精细化工2019年第9期

·1824· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 36 卷

图 3 表面活性剂溶剂种类对包衣菌体酶活的影响
Fig. 3 Effect of solvent types for 2C 12 GE on the activity of 图 5 包衣时间对包衣菌体酶活的影响
enzyme in coated bacteria Fig. 5 Effect of time on the activity of enzyme in coated
bacteria
2.2.4 缓冲液 pH 对 c9,t11-CLA 产量的影响
2.2.6 包衣温度对 c9,t11-CLA 产量的影响
本课题组在前期的研究中发现，乳酸菌中亚油
酸异构酶的最适反应 pH 为 5.8 [19] 。为使菌体中亚油 包衣处理时的温度会影响菌体中酶的活性，本
文比较了 4 和 25 ℃下酶活的差异，结果见图 6。由
酸异构酶在有机介质中仍保持较高的催化活性，比
图 6 可知，4 ℃包衣处理后，c9,t11-CLA 的产量为
较了菌体在不同 pH 缓冲液中包衣后的活性，结果
926 mg/L，而 25 ℃处理后 c9,t11-CLA 的产量为
见图 4。结果发现，在 pH 5.8 磷酸盐缓冲液中包衣后
的菌体催化活性最高（P>0.05），c9,t11-CLA 的产量 763 mg/L。表明，低温有利于保留菌体在包衣处理
为 915 mg/L，随 pH 增加，活性逐渐降低，pH＜5.8 时的活性，随着温度增高会显著降低菌体中酶的活
也会抑制酶活，这与大多数酶的最适 pH 在中性附 性（P>0.05）。因此，包衣处理选取在 4 ℃下进行。

近相符。研究结果表明，包衣菌体具有 pH 记忆效
应，菌体在最适 pH 缓冲液中进行包衣，能在有机
溶剂中仍然保持最高的催化活性 [20] 。

图 6 包衣温度对包衣菌体酶活的影响
Fig. 6 Effect of temperature on the activity of enzyme in
coated bacteria

图 4 缓冲液 pH 对包衣菌体酶活的影响 2.2.7 干燥方式对 c9,t11-CLA 产量的影响
Fig. 4 Effect of buffer pH on the activity of enzyme in 包衣酶常用的干燥方式是冷冻干燥法 [21] ，为了
coated bacteria
解不同干燥方式对包衣菌体催化活性的影响，比较
2.2.5 包衣时间对 c9,t11-CLA 产量的影响 了冷冻干燥法和热风干燥法（37 ℃，2 h）两种干燥
包衣时间将影响菌体包衣层的完整性和厚度， 方式对包衣菌体酶活的影响，结果见图 7。由图 7
从而影响到包衣菌体的催化活性，考察了包衣时间 可知，菌体经冷冻干燥后，c9,t11-CLA 的产量为
对 c9,t11-CLA 产量的影响，结果见图 5。由图 5 可 932 mg/L，而热风干燥后，c9,t11-CLA 的产量仅为
知，包衣处理 4 h，c9,t11-CLA 的产量为 932 mg/L， 368 mg/L。表明冷冻干燥能很好地保留菌体的催化
所制备包衣菌体的催化活性最高，显著高于 2、8 和 活性，而热风干燥对菌体的酶活破坏较大。因此，
10 h（P>0.05）。随包衣时间增加，活性逐步降低， 制备包衣菌体应选择冷冻干燥方式。
可能是包衣层过厚，阻止了底物与酶的接触，而处 通过研究影响包衣菌体催化活性的主要因素，
理时间过短也不利于包衣层的形成。因此，包衣处 确定了制备包衣菌体的条件为：表面活性剂为谷氨
理时间优选 4 h。 酸双十二烷基酯核糖醇（2C 12 GE），配制成质量分数